Page 82 - 《中国药房》2022年20期
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归芪通脉合剂由黄芪、当归、川芎、红花、赤芍、党                         97.7%）均购自中国食品药品检定研究院；羟基红花黄色
          参、桃仁、白术、陈皮、茯苓、甘草、地龙、僵蚕、蜈蚣14味                        素 A 对照品（批号 MUST-19082111，纯度 98.1%）、芍药
          中药组成，由经典名方“补阳还五汤”加减而成，全方以                           内酯苷对照品（批号 MUST-19041601，纯度 99.1%）、橙
          活血行气药为主，辅以通经活络之品，具有活血通络、行                           皮苷对照品（批号 MUST-19030701，纯度 98.5%）均购自
          气化瘀的功效，主要用于缺血性脑卒中恢复期气虚血瘀                            成都曼思特生物科技有限公司；芸香柚皮苷对照品（批
          证的临床治疗，对手足不遂、肢体麻木、舌强语蹇等症状                           号DST200519-098，纯度99.2%）购自成都德思特生物技
                        [1]
          的缓解效果较好 。                                           术有限公司；甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯，水为超纯水，
              本课题组前期对归芪通脉合剂的提取工艺进行了                           其余试剂均为分析纯。
          优化，并建立了黄芪甲苷和羟甲基红花黄色素A的含量                                13 批归芪通脉合剂[编号 S1～S13，批号分别为
                  [1]
          测定方法 。该药的现行质量标准除对制剂性状、装量、                           20210512、20210620、20210725、20210808、20210826、
          密度、pH值和微生物限度进行规定外，仅要求采用薄层                           20210924、20211005、20211028、20211205、20211219、
                                                     [2]
          色谱法对制剂中的党参、赤芍和黄芪进行定性鉴别 ，且                           20220108、20220117、20220223，规格100 mL（每1 mL相
          尚未见归芪通脉合剂质量控制的相关研究报道。由于                             当于饮片总量0.85 g）]均由漯河市第一人民医院制剂室
          中药复方制剂疗效的发挥是多种化学成分共同作用的                             提供。
          结果，故药材的薄层鉴别和单个或数个成分的含量测定                            2 方法与结果
                                            [3]
          无法充分反映归芪通脉合剂的整体质量 。                                 2.1 色谱条件
              指纹图谱结合化学模式识别可实现对中药饮片及                               色谱条件参考相关文献 ：以 Gemini Phenomenex
                                                                                       [1]
          其制剂整体质量的全面分析。中药指纹图谱技术能较                             C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以乙腈（A）-
          充分地提取中药及其复方制剂色谱图中的化学成分信                             0.1% 磷酸溶液（B）为流动相进行梯度洗脱（0～5 min，
          息，具有信息量大，专属性、整体性和模糊性强的特点，                           15%A→20%A；5～30 min，20%A；30～53 min，20%A→
                                          [4]
          是目前中药制剂分析的常用方法之一 。化学模式识别                            80%A；53～58 min，80%A→15%A）；流速为0.8 mL/min；
          技术可分为两类：一类是无监督的分析方法，包括层次                            柱温为30 ℃；检测波长为230 nm；进样量为5 μL。
          聚类分析（hierarchical cluster analysis，HCA）和主成分分        2.2  溶液的制备
          析（principle component analysis，PCA）等；另一类是有监         2.2.1  混合对照品溶液        取羟基红花黄色素A、芍药内
          督的分析方法，包括偏最小二乘法-判别分析和正交偏                            酯苷、芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、甘草酸铵、
          最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least square-         芸香柚皮苷、橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶
          discriminate analysis，OPLS-DA），上述方法可通过对指            解，得到上述各成分质量浓度分别为 524.89、406.47、
          纹图谱中的多维数据信息进行分类、降维等处理，筛选                            30.19、81.98、170.37、121.15、318.43、60.06 μg/mL的混合
          出其中的质量差异标志物，从而客观、系统、全面地分析                           对照品溶液。
          中药及其复方制剂的整体质量，并为其质量控制提供依                            2.2.2  供试品溶液       精密吸取归芪通脉合剂样品 2.5
            [5]
          据 。基于此，本研究拟建立归芪通脉合剂的高效液相                            mL，用甲醇定容至 10 mL 量瓶中，超声（功率 120 W，频
          色谱（HPLC）指纹图谱，同时结合化学模式识别技术全                          率40 kHz）提取30 min，静置后取上清液1.5 mL，置于离
          面、系统地评价该药的质量，旨在为后续的质量控制、药                           心管中，以 14 000 r/min 离心 10 min，取上清液，经 0.22
          效学和作用机制研究提供参考，为相关中药新药的开发                            μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
          提供依据。                                               2.3  HPLC指纹图谱的建立
          1 材料                                                2.3.1  精密度试验      精密吸取“2.2.2”项下编号为 S4 的
          1.1 主要仪器                                            供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续测定 6 次，以芸
              本 研 究 所 用 主 要 仪 器 有 LC-20AD 型 HPLC 仪 、          香柚皮苷为参照峰，计算各共有峰的相对峰面积和相对
          AUW-120D 型十万分之一电子天平（日本 Shimadzu 公                   保留时间。结果显示，各共有峰相对峰面积的 RSD 为
          司），5810R 型低温高速离心机（德国 Eppendorf 公司），                 0.21%～2.53%（n＝6），相对保留时间的RSD为0.02%～
          Milli-Q型超纯水仪（美国Millipore公司），KQ-600DE型               0.28%（n＝6），表明方法精密度良好。
          超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）等。                               2.3.2  稳定性试验      精密吸取“2.2.2”项下编号为 S4 的
          1.2 主要药品与试剂                                         供试品溶液，分别于室温下放置0、3、6、12、18、24 h时按
              芍药苷对照品（批号 110736-201842，纯度 97.4%）、 “2.1”项下色谱条件测定，以芸香柚皮苷为参照峰，计算
          毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（批号111920-201606，纯度                     各共有峰的相对峰面积和相对保留时间。结果显示，各
          97.6%）、甘 草 苷 对 照 品（批 号 111610-201607，纯 度            共有峰相对峰面积的 RSD 为 0.22%～3.24%（n＝6），相
          93.1%）、甘草酸铵对照品（批号 110731-201720，纯度                  对保留时间的 RSD 为 0.02%～0.76%（n＝6），表明样品


          ·2504·   China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20                                 中国药房    2022年第33卷第20期
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