Page 84 - 《中国药房》2022年20期

载荷系数分别为 0.888、0.757）；17 号峰和 19 号峰（橙皮 变 量 重 要 性 投 影（variable importance in the pro-
苷）是主成分 4 的主要决定因子（因子载荷系数分别为 jection，VIP）值越大，表示对应成分对样品的分类贡献
[12]
0.842、0.696）；主成分 5 中，18 号峰和 2 号峰的因子载荷 越大。本研究以 VIP 值＞1 为标准 ，筛选影响归芪通
系数较大，分别为0.874、0.832；主成分6主要反映了6号 脉合剂质量的差异标志物。结果（图 6）显示，共筛选得
峰和4号峰的信息（因子载荷系数分别为0.933、0.774）； 到 6 个对样品质量影响较大的共有峰，依次为 16 号峰
主成分 7 主要反映了 5 号峰的信息（因子载荷系数为 （芸香柚皮苷）、9号峰（芍药苷）、12号峰（甘草苷）、14号
0.776）。 峰（甘草酸铵）、11号峰、1号峰。
表1 归芪通脉合剂PCA特征值及方差贡献率
2.5
初始特征值 旋转后特征值 2.0
主成分
总计 方差贡献率/% 累计方差贡献率/% 总计 方差贡献率/% 累计方差贡献率/% 1.5
1 5.004 26.337 26.337 3.195 16.813 16.813 VIP值 1.0
2 3.046 16.033 42.370 2.980 15.683 32.497 0.5
3 2.810 14.790 57.160 2.770 14.577 47.074 0
－0.5
4 2.629 13.838 70.998 2.368 12.461 59.534
16 9 12 14 11 1 7 8 15 10 2 19 17 5 6 3 4 13 18
5 1.629 8.574 79.572 2.229 11.733 71.267 峰号
6 1.372 7.220 86.792 2.088 10.989 82.257 图6 归芪通脉合剂各共有峰的VIP值
7 1.011 5.323 92.115 1.873 9.858 92.115
3 讨论
2.6 OPLS-DA
3.1 提取条件的考察
为更好地分析样品之间的差异，本研究根据 PCA、
本课题组前期考察了不同提取溶剂（75%甲醇、50%
HCA 结果，以 19 个共有峰峰面积为变量，使用 SIMCA
甲醇、25% 甲醇、水）和超声提取时间（15、30、45 min）对
14.1软件对13批归芪通脉合剂样品进行OPLS-DA。结
供试品溶液色谱峰数量和响应强度的影响。结果显示，
果显示，模型 X 矩阵的解释能力参数（RX）、模型的稳定
2
以75%甲醇为溶剂超声提取30 min时，所得供试品溶液
2
2
性参数（RY）和模型的预测能力参数（Q）分别为 0.763、
色谱图中色谱峰的数量较多且响应较强，故选择75%甲
0.942、0.816，均大于 0.5，表明建立的模型拟合较好，具
醇为提取溶剂，超声提取时间为30 min。
[10]
有较高的稳定性和预测性 ，可用于分析不同批次归芪
3.2 色谱条件的优化
通脉合剂样品之间的质量差异。OPLS-DA 得分图（图
本课题组前期对流动相（乙腈-0.1% 甲酸溶液、乙
4）显示，13批样品可分为3类，与HCA结果一致。
腈-0.05% 磷酸溶液、乙腈-0.1% 磷酸溶液、乙腈-0.2%
t[2]
－2 000 －2 000 0 2 000 4 000 磷酸溶液）、柱温（25、30、35 ℃）、流速（0.8、1.0、1.2
2 000 0
4 000
mL/min）、洗脱程序进行了优化。结果显示，当选择流
3 000
动相为乙腈-0.1% 磷酸溶液、柱温为 30 ℃、流速为 0.8
2 000
mL/min并进行梯度洗脱时，所得色谱图的基线较平稳，
1 000
0 色谱峰数量较多，色谱峰分离度和峰形较好。同时，本
－1 000 t[1]
课题组使用二极管阵列检测器在190～800 nm波长下对
－2 000
－3 000 归芪通脉合剂供试品溶液进行了扫描，通过对比不同检
－2 000 0 2 000 4 000 测波长下各色谱图中的色谱峰数量、色谱峰响应强度和
t 0 [1]
图4 13批归芪通脉合剂样品的OPLS-DA得分图 基线稳定性发现，在230 nm波长处采集的色谱图基线较
平稳，色谱信息较丰富，色谱峰峰面积较大，故确定检测
在 OPLS-DA 载荷图中，各色谱峰投影点离原点越 波长为230 nm。
[11]
远，表明其代表的变量权重值越大 。由该载荷图（图 3.3 指纹图谱结果分析
5）可知，16、9、12、14、11、1、7 号峰对应成分具有较大的 为排除个别超常数据对结果的影响，本研究在建立
贡献。 13 批归芪通脉合剂样品的 HPLC 指纹图谱时选择了中
[13]
0.3 位数法，使得到的对照指纹图谱更具代表性 。13批样
0.2 品与对照指纹图谱的相似度为 0.928～0.990，表明归芪
0.996 725＊pq[2] －0.1 0 通脉合剂的制备工艺稳定性较好；但样品中部分成分色
0.1
－0.2
－0.3
－0.4 谱峰相对峰面积的RSD较大，这可能与样品原饮片来源
－0.5 不同有关；另外，从归芪通脉合剂样品中识别出8种化学
－0.8 －0.6 －0.4 －0.2 0 0.2
0.997 431＊pq[1] 成分，分别来自处方中的黄芪、红花、赤芍、甘草和
图5 13批归芪通脉合剂样品的OPLS-DA载荷图 陈皮 。
[1]
·2506· China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 中国药房 2022年第33卷第20期