Page 59 - 《中国药房》2022年20期

表2 哈巴苷等待测成分的回归方程、相关系数及线性 表3 15批潜阳育阴颗粒样品中7种待测成分的含量测
范围 定结果（mg/g）
待测成分 回归方程 相关系数（r） 线性范围/（μg/mL） 编号 哈巴苷 哈巴俄苷 莫诺苷 马钱苷 二苯乙烯苷 阿魏酸 杯苋甾酮
9
哈巴苷 Y＝6×10 X－222.99 0.999 7 0.968～19.360 S1 0.502 0.233 0.774 0.522 1.683 0.023 0.206
10
哈巴俄苷 Y＝1×10 X+208.62 0.999 9 0.568～11.350 S2 0.505 0.239 0.813 0.562 1.480 0.026 0.235
10
莫诺苷 Y＝1×10 X+1098 0.999 9 0.870～17.390 S3 0.563 0.377 0.810 0.538 1.450 0.026 0.195
马钱苷 Y＝7×10 X+360.27 0.999 7 0.670～13.400 S4 0.449 0.253 0.706 0.484 1.294 0.025 0.194
9
二苯乙烯苷 Y＝8×10 X－114 904 0.999 0 18.200～273.000 S5 0.507 0.255 0.821 0.554 1.435 0.020 0.228
12
10
阿魏酸 Y＝3×10 X－1.952 3 0.999 8 0.025～0.490 S6 0.503 0.266 0.820 0.527 1.727 0.023 0.230
9
杯苋甾酮 Y＝8×10 X+62.944 0.999 9 0.259～5.187 S7 0.486 0.230 0.828 0.548 1.474 0.022 0.227
谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果显示，哈巴苷、 S8 0.449 0.210 0.692 0.457 1.496 0.022 0.195
S9 0.507 0.211 0.837 0.480 2.030 0.026 0.217
哈巴俄苷、莫诺苷、马钱苷、二苯乙烯苷、阿魏酸、杯苋甾 S10 0.441 0.205 0.827 0.443 1.905 0.021 0.216
酮峰面积的 RSD 分别为 3.88%、3.71%、3.36%、3.67%、 S11 0.515 0.237 0.805 0.473 2.029 0.026 0.219
2.85%、3.05%、3.22%（n＝6），表明仪器精密度良好。 S12 0.336 0.251 0.712 0.452 1.535 0.023 0.167
S13 0.529 0.270 0.779 0.433 1.835 0.027 0.205
2.3.7 稳定性试验 按照“2.3.2”项下方法制备潜阳育 S14 0.510 0.255 0.753 0.434 1.774 0.022 0.218
阴颗粒（编号 S1）供试品溶液，分别在室温下放置 0、2、 S15 0.513 0.245 0.795 0.453 1.890 0.027 0.226
4、8、12、24 h 时按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录 倍量）、提取方式（超声、回流提取）、提取时间（10、20、30
峰面积。结果显示，哈巴苷、哈巴俄苷、莫诺苷、马钱苷、 min）进行了考察，结果显示，以20倍量的70%甲醇超声
二苯乙烯苷、阿魏酸、杯苋甾酮峰面积的 RSD 分别为 提取 20 min 的效果最优，故采用上述方法制备供试品
2.59%、1.71%、0.28%、3.30%、1.22%、1.87%、2.32%（n＝ 溶液。
6），表明该溶液在室温下放置24 h内稳定。 3.2 色谱条件的优化
2.3.8 重复性试验 取同一批次潜阳育阴颗粒样品（编 本课题组前期通过二极管阵列检测器在 190～400
号S1）6份，按照“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，再按 nm 波长范围内扫描发现，在 250 nm 波长处所得色谱峰
照“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准 较多且分离度较好，所以UPLC指纹图谱的检测波长设
曲线法计算含量。结果显示，哈巴苷、哈巴俄苷、莫诺 为 250 nm。同时，本课题组综合 2020 年版《中国药典》
苷、马钱苷、二苯乙烯苷、阿魏酸、杯苋甾酮含量的 RSD （一部）和文献相关内容 [13，16] ，最终确定定量分析中哈巴
分 别 为 3.59%、4.71%、3.66%、4.07%、4.89%、4.70%、 苷、哈巴俄苷的检测波长为202 min，莫诺苷、杯苋甾酮、
3.96%（n＝6），表明方法重复性良好。 马钱苷的检测波长为250 nm，阿魏酸和二苯乙烯苷的检
2.3.9 加样回收率试验 取已知含量的同一批次潜阳 测波长为320 nm。
育阴颗粒样品（编号 S1）6 份，精密加入哈巴苷、哈巴俄 本课题组进一步考察了甲醇-水（含 0.1% 磷酸）、乙
苷、莫诺苷、马钱苷、二苯乙烯苷、阿魏酸、杯苋甾酮单一 腈-水（含 0.1% 磷酸）、乙腈-水（含 0.2% 磷酸）等不同流
对照品溶液（以甲醇为溶剂配制，对应加入量分别为 动相体系及不同柱温（30、35、40 ℃）对色谱峰分离的影
0.125 0、0.066 7、0.210 0、0.132 0、0.173 8、0.005 8、0.057 0 响，最终选择流动相为乙腈-水（含 0.1% 磷酸），柱温为
mg），按照“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，再按照 35 ℃。方法学考察结果显示，在“2.1.1”“2.3.1”项下色谱
“2.3.1”项下色谱条件进样测定，计算加样回收率。结果 条件下，所得色谱峰峰形及分离度均良好。
显示，各待测成分的平均加样回收率分别为 105.55%、 3.3 结果分析
95.00%、101.32%、101.43%、97.79%、105.17%、102.28%， 本研究建立了潜阳育阴颗粒的 UPLC 指纹图谱，该
RSD分别为2.90%、2.53%、2.47%、4.11%、4.83%、2.07%、 法操作简便、结果准确；15 批潜阳育阴颗粒指纹图谱与
4.13%（n＝6），表明方法准确度良好。 对照指纹图谱的相似度均大于0.96，表明15批制剂所含
2.3.10 含量测定 取 15 批潜阳育阴颗粒样品，按照 成分的相似度较高，质量均一、稳定。化学模式识别分
“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，再按照“2.3.1”项下色 析结果表明，不同批次的潜阳育阴颗粒样品具有一定的
谱条件进样测定，记录峰面积并按标准曲线法计算含 差异。其中，CA 与 PCA 的分类结果基本一致，15 批潜
量，结果见表3。 阳育阴颗粒样品可被分为 6 类，即 S1、S2、S4～S6 为一
3 讨论 类，S3 为一类，S7、S8 为一类，S9、S10 为一类，S11～S14

3.1 提取方法的优化 为一类，S15为一类；PLS-DA结果则将S1、S4、S6分为一
本课题组前期以潜阳育阴颗粒色谱图中色谱峰数 类，S2、S3、S5 分为一类，S7～S10 分为一类，S11 分为一
量、分离效果及哈巴苷、哈巴俄苷、莫诺苷、马钱苷、二苯 类，S12～S14 分为一类，S15 分为一类，这可能与 CA、
乙烯苷、阿魏酸、杯苋甾酮总提取率为指标，对不同提取 PCA 和 PLS-DA 建模方式的不同有关。PCA 载荷图与
溶剂（甲醇、70% 甲醇、50% 甲醇）、溶剂用量（20、30、40 VIP 值筛选结果均提示莫诺苷（峰 6）、马钱苷（峰 7）、二

中国药房 2022年第33卷第20期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 20 ·2485·