Page 77 - 《中国药房》2022年19期

400 2 000
350 1 800
300 1 600
250 1 400
200
150 7 1 200
mAU 100 2 3 6 mAU 1 000
50 800
0 A 600
－50
－100 B 400
－150 C 200
－200 D 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60
t/min t/min
A：混合对照品贮备液；B：供试品溶液；C：缺山豆根阴性制剂供试 图2 11批伤科灵喷雾剂的HPLC叠加特征图谱与对照
溶液；D：缺铁筷子阴性制剂供试溶液；2：苦参碱；3：氧化苦参碱；6：东 特征图谱R
莨菪内酯；7：异嗪皮啶
300
图1 系统适用性考察的HPLC图
250
面积。以东莨菪内酯峰（峰 6）为参照峰，计算得到各共 200 7
有峰相对保留时间的RSD均小于1.44%（n＝6），相对峰 150 2 3 6
面 积 的 RSD 均 小 于 4.21%（n＝6），表 明 方 法 精 密 度 mAU 100
50 A
良好。 0 B
2.3.2 重复性试验 精密量取 6 份伤科灵喷雾剂（编号 －50
S5）各 5 mL，分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液， －100
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
然后按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录各共有峰的保 t/min
留时间及峰面积。以东莨菪内酯峰（峰 6）为参照峰，计 A：混合对照品贮备液；B：供试品溶液：2：苦参碱；3：氧化苦参碱；
6：东莨菪内酯；7：异嗪皮啶
算得到各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 1.47%
图3 混合对照品与供试品的色谱图
（n＝6），相对峰面积的 RSD 均小于 4.03%（n＝6），表明
该方法重复性良好。 为 0.971、0.990、0.992、0.978、0.992、0.992、0.991、0.990、
2.3.3 稳定性试验 精密量取伤科灵喷雾剂（编号 S5） 0.992、0.991、0.996，均≥0.990，表明 11 批样品之间的相
5 mL，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下 似度较高。
色谱条件分别在室温放置 0、2、5、12、24 h 时进样测定， 2.4 苦参碱等4个成分的含量测定
记录各共有峰的保留时间及峰面积。以东莨菪内酯峰 2.4.1 线性关系考察 精密量取“2.1.1”项下混合对照
（峰 6）为参照峰，计算得到各共有峰相对保留时间的 品贮备液 50、100、200、400、600、800 μL，用甲醇定容至
RSD 均小于 1.71%（n＝5），相对峰面积的 RSD 均小于 1 mL，得到系列线性工作液。取上述线性工作液，分别
4.97%（n＝5），表明供试品溶液在室温24 h内较稳定。 按“2.2”项下色谱条件进样测定，以对照品质量浓度（X，
2.3.4 特征图谱的建立及共有峰的指认 精密量取 11 µg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行回归分析，得
批样品（编号S1～S11）各5 mL，按“2.1.2”项下方法制备 苦参碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶的回归方程
2
供试品溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录色图 分别为Y＝0.120 4X+0.917 8（R ＝0.999 0）、Y＝0.133 5X+
2
2
谱。将11批样品的色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似 0.900 6（R ＝0.999 1）、Y＝1.344 3X－0.212 6（R ＝0.999 9）、
2
度评价软件（2012 版）》，以样品 S2 的色谱图为参照图 Y＝1.655 5X－0.147 7（R ＝0.999 6）。结果表明，苦参
谱，设置时间窗宽度为0.1 min，采用多点校正法生成11 碱、氧化苦参碱、东莨菪内酯、异嗪皮啶分别在10～160、
批样品的叠加特征图谱，并采用中位数法生成伤科灵喷 10～160、2.5～40、2.5～40 μg/mL 质量浓度范围内线性
雾剂的对照特征图谱R，见图2。结果，11批样品共确认 关系良好。
了 18 个共有特征峰。将供试品图谱与混合对照品图谱 2.4.2 精密度试验 取“2.1.1”项下混合对照品贮备液
比对，指认出了 4 个共有特征峰，分别为峰 2（苦参碱）、 600 μL，以甲醇定容至1 mL，按“2.2”项下色谱条件连续
峰3（氧化苦参碱）、峰6（东莨菪内酯）、峰7（异嗪皮啶）， 进样6次，记录峰面积。结果，苦参碱、氧化苦参碱、东莨
见图3。 菪内酯、异嗪皮啶峰面积的 RSD 分别为 1.31%、1.57%、
2.3.5 相似度分析 以对照特征图谱 R 为参照，采用 0.54%、0.66%（n＝6），表明仪器精密度良好。
《中药色谱指纹图谱相似度评价软件（2012 版）》计算 11 2.4.3 稳定性试验 取伤科灵喷雾剂（编号 S5）5 mL，
批样品的特征图谱与对照特征图谱R的相似度。结果， 按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在室温下放置0、2、
样品S1～S11的色谱图与对照特征图谱R的相似度分别 7、12、24 h时，分别按“2.2”项下色谱条件进样测定，记录

中国药房 2022年第33卷第19期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 19 ·2371·