Page 62 - 《中国药房》2022年19期
P. 62

CONCLUSIONS HRCHQ can improve MsPGN by reducing the proliferation of mesangial cells and inhibiting the activity of PI3K/
          Akt/GSK3β signaling pathway.
          KEYWORDS     Leontopodium leontopodioides；Astragalus memeranaceus；mesangial proliferative glomerulonephritis；mesangial
          cell；PI3K/Akt/GSK-3β signaling pathway


              系膜增生性肾小球肾炎（mesangial proliferative glo‐         Beauv.和膜荚黄芪A. membranaceus（Fisch.）Bge.。盐酸
          merulonephritis，MsPGN）是以肾小球系膜细胞增殖和细                 贝那普利片（阳性对照药，批号X2657，规格10 mg）购自北
                                         [1]
          胞外基质沉积为特征的肾小球疾病 。尽管 MsPGN 是                         京诺华制药有限公司；牛血清蛋白（bovine serum albumin，
                                                    [2]
          终末期肾病的主要原因，但其机制尚未完全阐明 。相                            BSA）、弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂（批号分别为
          关研究发现，免疫复合物清除障碍、免疫调节功能障碍                            WXBC7359V、SLBV6895、SLBT5128）均 购 自 美 国
                                   [3]
          和细胞凋亡均可导致MsPGN 。目前，临床上常联合糖                          Sigma 公 司 ；脂 多 糖（lipopolysaccharide，LPS）（批 号
          皮质激素、免疫抑制剂、抗血小板药物和抗血脂药物等                            1116L031）购自北京索莱宝科技有限公司；尿素氮试剂
                                    [4]
          来治疗 MsPGN，但疗效较差 。因此，开发新的治疗                          盒（批号 20180920）和白蛋白试剂盒（批号 20180820）
          MsPGN的药物具有重要意义。                                     购自南京建成生物工程研究所；兔抗补体 C3、β-肌动蛋
              火绒草为菊科火绒草属植物火绒草 Leontopodium                    白（β-actin）多克隆抗体（批号分别为 AH10106155、bs-
          leontopodioides（Willd.）Beauv.的全草，具有清热凉血、益           10966R）购自北京博奥森生物技术有限公司；FITC 标
                                [5]
          肾利水、消炎利尿的功效 ，常用于抑制炎症及消除水                            记的羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗（批号BST13H30C
            [6]
          肿 。 黄 芪 为 膜 荚 黄 芪 Astragalus membranaceus           05）购自武汉博士德生物工程有限公司；兔抗 TNF-α、
         （Fisch.）Bge. 的干燥根，具有益气固表、健脾温中、利水                     TGF-β1、PI3K、Akt、磷酸化 Akt（p-Akt）、磷 酸 化 PI3K
                                           [7]
          消肿的功效，临床上常用于肾炎的治疗 。研究发现，尿                          （p-PI3K）、FN 多克隆抗体（批号分别为EPR21753-109、
          蛋白是反映肾脏病变严重程度的重要标志，尿蛋白的增                            EPR21143、 EPR18702、EPR16798、EPR18853、EPR-
                                    [8]
          加可加速 MsPGN 疾病的进程 。本课题组前期研究发                         18702、EPR2311025）均 购 自 美 国 Abcam 公 司 ；兔 抗
          现，火绒草黄芪混煎液（HRCHQ）可降低MsPGN模型大                        GSK3β、磷酸化 GSK3β（p-GSK3β）多克隆抗体（批号分
                                              [9]
          鼠尿蛋白含量，改善肾组织的病理学变化 。相关研究                            别为 12456T、9323T）均购自美国 Cell Signaling Technol‐
          发现，磷脂酰肌醇 3 激酶/蛋白激酶 B/糖原合酶激酶 3β                      ogy公司；其余试剂均为分析纯，水为纯净水。
         （phosphatidylinositol 3 kinase/protein kinase B/glycogen  1.3  动物
          synthase kinase 3β，PI3K/Akt/GSK3β）信 号 通 路 在             本研究所用动物为SPF级健康SD大鼠，雄性，共70
          MsPGN 的病理过程中具有重要作用，激活该信号通路                          只，体质量 180～220 g，购自辽宁长生生物技术有限公
                                             [10]
          可促进系膜细胞增殖及细胞外基质增生 。另外，抑制                            司，动物生产许可证号为SCXY（辽）2018-0001。所有受
          肿瘤坏死因子 α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、转移          试动物于辽宁中医药大学实验动物中心饲养。饲养室
          生长因子 β1 （transforming growth factor β1，TGF-β1 ）、补   温度为20～23 ℃，湿度为50%～60%。
          体C3、纤连蛋白（fibronectin，FN）的表达，对改善肾功能                  2 方法
                      [11]
          具有重要作用 。基于此，笔者建立MsPGN大鼠模型，                          2.1  HRCHQ的制备
          探讨 HRCHQ 对该模型大鼠 TNF-α、TGF-β1、补体 C3、                     取火绒草150 g、黄芪300 g，加4 500 mL水，浸泡30
          FN 表达的影响及其对 PI3K/Akt/GSK3β 信号通路的调                   min后，煎煮2 h，滤过，收集滤液；残渣加3 000 mL水，煎
          控作用，以期为HRCHQ治疗MsPGN提供实验依据。                          煮 1 h，滤过，收集滤液；残渣再次加 1 500 mL 水，煎煮
          1 材料                                                0.5 h，滤过，收集滤液。合并3次滤液，浓缩成质量浓度
          1.1 主要仪器                                            为 0.27 g/mL 的 HRCHQ（以生药量计），置于 4 ℃下保
              本研究所用主要仪器有 BX-53 型显微镜（日本                        存，待用。
          Olympus 公司）、Neofuge 13R 型酶标仪（美国 Bio Rad 公           2.2 分组、造模与给药
          司）、Tanon 5200型全自动化学分光图像分析系统（上海                          将70只大鼠按体质量分为假手术组（n＝10）和造模
          天能科技有限公司）、Revolve 型荧光显微镜（美国 Echo                    组（n＝60）。造模组大鼠参考文献[12―13]的免疫学方
          公司）。                                                法复制MsPGN模型，具体如下：大鼠经戊巴比妥钠腹腔
          1.2 主要药品与试剂                                         注射（50 mg/kg）麻醉后，剃毛，切除大鼠左侧肾脏；肾脏
              火绒草和黄芪均购自辽宁中医药大学附属第二医                           切除术后第2周末，大鼠皮下注射0.1 mL A液（即弗氏完
          院药剂科，经辽宁中医药大学第二临床学院药物分析室                            全佐剂 0.1 mL+3.0 mg BSA）；第 3 周末和第 4 周末大鼠
          尤献民教授鉴定为火绒草 L. leontopodioides（Willd.）              皮下注射 0.1 mL B 液（即弗氏不完全佐剂 0.1 mL+3.0


          ·2360·   China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 19                                 中国药房    2022年第33卷第19期
   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66   67