Page 67 - 《中国药房》2022年19期
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绝经综合征又称为“围绝经期综合征”或“更年期综                        别为 90、60 min，合并 2 次煎液并浓缩成质量浓度为 1.8
          合征”，大多数患者会出现头晕、出汗、烦躁、易怒、失眠                         g/mL的药液（以生药量计）]。其他药品与试剂有更年安
          健忘、腰膝酸软等一系列症状。目前，我国约有1.3亿女                         片（中药阳性对照药，江西南昌桑海制药有限责任公司，
          性处于绝经期，其中出现绝经综合征者占比高于 90%，                         批号 190387），戊酸雌二醇片（化学药阳性对照药，拜耳
          严重影响绝经期女性的身心健康和生活质量 。                              医药保健有限公司广州分公司，批号 491A），LH、FSH、
                                                [1]
              现代医学认为，绝经综合征的发生机制与下丘脑-                         E2酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（江苏酶免实业有
          垂体-卵巢轴（hypothalamus-pituitary-ovary，HPO）功能失        限公司，货号分别为 MM-0624R1、MM-0566R1、MM-
          调有关   [2―3] 。女子进入绝经期阶段后，卵巢功能日渐退                    0575R1），全蛋白提取试剂盒、BCA试剂盒、十二烷基硫
          化，性激素分泌异常，使HPO功能异常，进而引起生殖、                         酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂盒、ECL发光液（沈阳万
          内分泌等系统功能失调，形成多系统、多症状的女性绝                           类生物科技有限公司，货号分别为 WLA019、WLA004、
                    [4]
          经期症候群 。针对该病的治疗手段，现代医学多用性                           WLA013、WLA003）。本研究所用兔源亲吻素 1（kiss‐
          激素代替疗法，可随着医疗水平的进步，逐渐发现性激                           peptin 1，Kiss-1）、细胞外调节蛋白激酶 1/2（extracellular
          素代替疗法疗效欠佳，且易引起诸多不良反应，如心脑                           regulated protein kinase 1/2，ERK1/2）、磷 酸 化 ERK1/2
          血管性疾病、子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌等                 [5―7] 。因此，   （phosphorylated，p-ERK1/2）、辣根过氧化物酶标记的山
          寻找新的治疗绝经综合征的药物具有重要意义。                              羊抗兔免疫球蛋白 G（二抗）、β-肌动蛋白（β-                 actin）抗
              二仙汤出自《中医方剂临床手册》，具有补肾泻火、                        体均购自沈阳万类生物科技有限公司（货号分别为
          调理冲任的作用。固本安神方在二仙汤的基础上化裁                            WL02651、WL01864、WLP1512、WLA023、WL01372）；三
          加味而来，主要由葛根、黄芩、远志、夜交藤等12味药材                         磷酸肌醇受体 1（inositol triphosphate receptor 1，IP3R1）、
          组成，临床上治疗肾阴阳俱虚证有较好的疗效，沧州市                           Kiss-1、GnRH、β-actin 的 PCR 引物均由金斯瑞生物科技
          人民医院（以下简称“我院”）拟将其开发为治疗绝经综                          有限公司合成（引物序列及扩增产物长度见表1）。
          合 征 的 药 物 。 有 研 究 表 明 ，促 性 腺 激 素 释 放 激 素                   表1   PCR引物序列及扩增产物长度
         （gonadotropin-releasing hormone，GnRH）既可接受雌二          基因        序列（5′→3′）                    产物长度
          醇（estradiol，E2 ）的反馈调节，又可调节促黄体生成素                    IP 3R1    上游引物：GATGGACCTGGTGTTAGA       238
                                                                        下游引物：AGCGAGGATGTAGATGTTA
         （luteinizing hormone，LH）和促卵泡生长激素（follicle            Kiss-1    上游引物：CACCCGCAGTCGCCTGATCC     114
          stimulating hormone，FSH）的释放，在 HPO 轴中发挥重                       下游引物：ACCTGCCTCCTGCCGTAGCG
                                                              GnRH      上游引物：GCCGCTGTTGTTCTGTT        132
                [2]
          要作用 。基于此，本研究基于GnRH分泌信号通路，探
                                                                        下游引物：CTCCTCCTTGCCCATCT
          讨固本安神方对绝经综合征的改善作用及机制，以期为                            β-actin   上游引物：GGAGATTACTGCCCTGGCTCCTAGC  155
          该方治疗绝经综合征提供实验依据。                                              下游引物：GGCCGGACTCATCGTACTCCTGCTT
          1 材料                                               1.3  动物
          1.1  主要仪器                                              本研究所用动物为健康SD雌性大鼠，清洁级，体质
              本研究所用主要仪器有 TGL16M 型台式高速冷冻                      量 220～250 g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司，
          离 心 机（上 海 卢 湘 仪 离 心 机 仪 器 有 限 公 司）、                实验动物生产许可证号为 SCXK（辽）2020-0001。大鼠
          LABOSPECT 008AS 型全自动生化分析仪[日立高新技                    饲养于河北省人民医院实验动物中心，环境温度为22～
          术（上海）国际贸易有限公司]、Rayto RT-6100 型酶标仪                  25 ℃，相对湿度为 50%～55%，光照时间为 12 h，明暗
         （深圳雷杜生命科学股份有限公司）、ME155D型分析天                         交替。
          平（瑞士 Mettler Toledo 公司）、BX53 型显微镜（日本               2 方法
          Olympus 公司）、NANO 2000 型紫外分光光度计（美国                  2.1 造模、分组与给药
          Thermo Fisher Scientific 公司）、Exicycler 96 型荧光定量        将80只大鼠适应性喂养7 d后，随机取70只大鼠参
          聚合酶链式反应（PCR）仪（韩国 Bioneer 公司）、WD-                   考文献[8―9]方法复制绝经综合征模型：大鼠侧卧于手
          9413B型凝胶成像系统（北京六一生物科技有限公司）。                        术台上，于肋脊角下方 2 cm 与脊柱外侧 2 cm 交叉处剪
          1.2  主要药品与试剂                                       毛、消毒；切开皮肤，钝性剥离筋膜膜层、肌肉层、腹膜
              固本安神方煎煮液由我院中药房自制[将葛根、黄                         层；结扎输卵管和周围脂肪组织，切除卵巢及周围脂肪
          芩、五味子、生地、淫羊藿、巴戟天、仙茅、知母、丹皮、夜                        组织，撒敷适量青霉素粉，分层缝合组织。同法将大鼠
          交藤、酸枣仁、远志12味中药按处方比例称取适量，然后                         另一侧卵巢及周围脂肪组织切除。术后第5天开始，对
          用10倍量（mL/g）水浸泡0.5 h后，回流提取2次，时间分                    每只大鼠进行阴道涂片检查，每天 1 次，连续 7 d。当镜


          中国药房    2022年第33卷第19期                                            China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 19  ·2365·
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