Page 38 - 《中国药房》2022年19期

0.05），模拟微重力对照组成骨细胞 ALP 活性显著降低 白相对表达水平显著降低（P＜0.05）。结果见图4。
（P＜0.05）；与模拟微重力对照组比较，模拟微重力柚皮
Runx2 67 kDa
苷组成骨细胞 ALP 活性显著升高（P＜0.05）。结果见
图2B。 IL-6 23 kDa
100 100 GAPDH 38 kDa
a
80 a 80 Ⅰ Ⅱ A. 电泳图 Ⅲ Ⅳ
细胞增殖率/% 60 b （ nmol/μg ） 60 b 1.0 a 1.0 a b
40
40
20 a ALP活性/ 20 a 0.8 a b 0.8 a
0.6
0.6
0 0 蛋白相对表达水平 蛋白相对表达水平
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 0.4 0.4
A.成骨细胞增殖率 B.成骨细胞ALP活性
0.2 0.2
Ⅰ：正常重力对照组；Ⅱ：正常重力柚皮苷组；Ⅲ：模拟微重力对照
组；Ⅳ：模拟微重力柚皮苷组；a：与正常重力对照组比较，P＜0.05；b： 0 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
与模拟微重力对照组比较，P＜0.05 B. Runx2蛋白相对表达水平 C. IL-6蛋白相对表达水平
图2 各组成骨细胞增殖率及成骨细胞ALP活性比较 Ⅰ：正常重力对照组；Ⅱ：正常重力柚皮苷组；Ⅲ：模拟微重力对照
3.4 成骨细胞中 Runx2、IL-6 mRNA 相对表达的检测 组；Ⅳ：模拟微重力柚皮苷组；a：与正常重力对照组比较，P＜0.05；b：
与模拟微重力对照组比较，P＜0.05
结果
图4 各组成骨细胞 Runx2、IL-6 的蛋白相对表达水平
实时荧光定量PCR检测结果显示，与正常重力对照
比较
组比较，正常重力柚皮苷组成骨细胞的Runx2 mRNA相
对表达水平显著升高、IL-6 mRNA相对表达水平显著降 4 讨论
低（P＜0.05），模拟微重力对照组成骨细胞的 Runx2 骨免疫学研究表明，骨细胞和免疫细胞在骨髓中共
mRNA相对表达水平显著降低、IL-6 mRNA相对表达水 享相同的微环境，并存在复杂而密切的相互作用，例如T
平显著升高（P＜0.05）；与模拟微重力对照组比较，模拟 细胞及其分泌的炎症因子被证明在骨质疏松、类风湿性
微重力柚皮苷组成骨细胞的 Runx2 mRNA 相对表达水 关节炎等疾病中发挥了关键作用 [15―17] 。
平显著升高、IL-6 mRNA 相对表达水平显著降低（P＜ 既往研究结果显示，T细胞在活化后产生IL-6，经核
0.05）。结果见图3。 因子 κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）信号通路途径
促进破骨细胞活性、加强骨吸收，Runx2是骨形成过程中
2.5 4
a a
必需的转录因子，其可以激活骨形态蛋白表达，从而促
2.0
mRNA相对表达水平 1.5 b mRNA相对表达水平 2 b 微重力环境下 IL-6 的 mRNA 和蛋白相对表达上调的同
3
。本实验结果显示，模拟
[18―20]
进成骨细胞的进一步分化
1.0
时，成骨细胞增殖率、ALP活性、Runx2的mRNA和蛋白
1
a
0.5
a
相对表达均明显降低，提示IL-6可促进成骨细胞中NF-κB
0 0 通路的激活，从而参与微重力对成骨细胞的负性调控作
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
A. Runx2 mRNA相对表达水平 B. IL-6 mRNA相对表达水平 用。既往研究发现，将成骨细胞前体细胞MC3T3-E1培
Ⅰ：正常重力对照组；Ⅱ：正常重力柚皮苷组；Ⅲ：模拟微重力对照 养于 RCCS 中，ALP、Runx2、骨钙素等成骨标志物表达
组；Ⅳ：模拟微重力柚皮苷组；a：与正常重力对照组比较，P＜0.05；b： 下调，IL-6 水平异常升高，NF-κB 信号分子磷酸化水平
与模拟微重力对照组比较，P＜0.05 升高 [21―22] 。这些研究结果与本实验结果一致，提示模拟
图3 各组成骨细胞 Runx2、IL-6 mRNA 相对表达水平
微重力条件下 IL-6 水平的异常升高及 Runx2 水平的降
比较
低是成骨细胞功能抑制的重要因素之一。
3.5 成骨细胞中Runx2、IL-6蛋白相对表达的检测结果 有研究显示，柚皮苷能够通过抑制NF-κB活性来抑
Western blot法检测结果显示，与正常重力对照组比 制成骨细胞炎症因子的分泌，此外，柚皮苷能提高成骨
较，正常重力柚皮苷组成骨细胞的Runx2蛋白相对表达 细胞 Runx2 的水平，从而激活骨形态蛋白表达，并促进
水平显著升高、IL-6 蛋白相对表达水平显著降低（P＜ 成骨反应 [23―26] 。本实验结果显示，柚皮苷作用于模拟微
0.05），模拟微重力对照组成骨细胞的Runx2蛋白相对表 重力条件下T细胞-成骨细胞共育体系，能够显著抑制炎
达水平显著降低、IL-6蛋白相对表达水平显著升高（P＜ 症因子 IL-6 的表达，提示柚皮苷可能通过降低 IL-6 水
0.05）；与模拟微重力对照组比较，模拟微重力柚皮苷组 平，抑制NF-κB通路活性，从而减轻炎症反应。同时，本
成骨细胞的Runx2蛋白相对表达水平显著升高、IL-6蛋 实验结果发现，柚皮苷干预下成骨细胞增殖率、ALP 活

·2336· China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 19 中国药房 2022年第33卷第19期