Page 62 - 《中国药房》2022年18期
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450                                               2.4 QAMS法的建立
            400
            350                                               2.4.1  相对校正因子的计算           用对照品质量浓度与峰
            300
            mAU  250                                          面积之比计算各待测成分的相对校正因子（relative cor‐
            200
            150                              混合对照品溶液          rection factor，RCF），即 RCF＝（Wk×As ）/（Ws×Ak ）（式中
            100                              供试品溶液
             50                              缺肉桂阴性供试品溶液       W和A分别为质量浓度和峰面积，下标k和s为其他待测
                                             缺熟地黄和车前子阴性供试品溶液
             0                               缺盐补骨脂阴性供试品溶液
               0  5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70    成分和内参物）。按“2.1”项下色谱条件进样测定“2.3.2”
                             t/min                            项下6个系列质量浓度的混合对照品溶液，以补骨脂素
              1：肉桂酸；2：桂皮醛；3：大车前苷；4：毛蕊花糖苷；5：异毛蕊花糖              为内参物，计算得肉桂酸、桂皮醛、大车前苷、毛蕊花糖
          苷；6：木通苯乙醇苷B；7；补骨脂素；8：异补骨脂素；9：新补骨脂异黄                 苷、异毛蕊花糖苷、木通苯乙醇苷B、异补骨脂素、新补骨
          酮；10：补骨脂二氢黄酮
                 图1 固肾定喘丸定量分析的HPLC图                           脂异黄酮和补骨脂二氢黄酮的 RCF 分别为 2.818 7、
                                                              1.567 8、2.202 3、1.227 0、1.744 4、4.466 7、0.970 0、1.084 8
          表1 固肾定喘丸中 10 个待测成分的回归方程和线性                          和1.257 7，RSD均小于2.00%（n＝6）。
               范围
                                                              2.4.2  RCF 耐用性试验      精密吸取“2.2.1”项下混合对
           待测成分            回归方程        线性范围/（µg/mL）  r
           肉桂酸          Y＝9.196 7×10 X+756.3  0.99～49.50  0.999 1  照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，
                              5
           桂皮醛          Y＝1.656 1×10 X+1 056.5  2.36～118.00  0.999 3  分别考察不同 HPLC 仪（Waters 2695 型、Agilent 1200
                              6
           大车前苷         Y＝1.188 5×10 X－944.1  1.48～74.00  0.999 5  型，下同）、不同色谱柱[Agilent SB-C18、Phenomenex Su‐
                              6
           毛蕊花糖苷        Y＝2.127 8×10 X+243.7  10.65～532.50  0.999 3
                              6
           异毛蕊花糖苷       Y＝1.498 2×10 X－1 197.2  2.07～103.50  0.999 4  perLu C18、Welch Ultimate XB C18，规格均为（250 mm×
                              6
           木通苯乙醇苷B      Y＝5.848 4×10 X+943.9  0.68～34.00  0.999 5  4.6 mm，5 μm），下同]、不同流速（0.8、1.0、1.2 mL/min）及
                              5
                              6
           补骨脂素         Y＝2.615 3×10 X－467.3  7.04～352.00  0.999 4  不同柱温（25、30、35 ℃）对所建立的RCF的影响。结果
                              6
           异补骨脂素        Y＝2.700 3×10 X－1 384.5  4.80～240.00  0.999 3
                              6
           新补骨脂异黄酮      Y＝2.397 4×10 X+828.1  2.86～143.00  0.999 2  显示，不同仪器及不同色谱柱下肉桂酸等上述9个待测
                              6
           补骨脂二氢黄酮      Y＝2.079 6×10 X－1 088.0  2.69～134.50  0.999 4  成分的平均RCF分别为2.816 4、1.571 5、2.204 5、1.222 4、
          桂酸等 10 个待测成分峰面积的 RSD 均小于 2.00%（n＝                   1.743 5、4.463 6、0.968 1、1.079 0 和 1.254 0，不同流速下
          6），表明方法精密度良好。                                       的平均RCF分别为2.814 7、1.560 6、2.208 3、1.227 8、1.746 2、
          2.3.4  重复性试验       精密称取同一批固肾定喘丸样品                   4.468 9、0.971 1、1.081 7 和 1.259 2，不同柱温下的平均
         （编号 S1）6 份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶                      RCF 分别为 2.813 1、1.564 3、2.218 0、1.225 6、1.742 6、
          液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并用外                         4.466 0、0.963 8、1.082 9 和 1.255 0，RSD 均小于 2.00%
                                                             （n＝9），表明RCF耐用性良好。
          标法计算含量。结果显示，肉桂酸等10个待测成分含量
                                                              2.4.3  色谱峰定位      采用相对保留时间值（relative re‐
          的RSD均小于2.00%（n＝6），表明方法重复性良好。
                                                              tention time，RRT）法对待测成分色谱峰进行定位，精密
          2.3.5  稳定性试验      取供试品溶液（编号S1），分别在室
                                                              吸取“2.2.1”项下混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件
          温下放置0、2、4、6、12、24 h时按“2.1”项下色谱条件进样
                                                              进样测定，以补骨脂素为内参物，考察不同仪器和不同
          测定，记录峰面积。结果显示，肉桂酸等10个待测成分
                                                              色谱柱对肉桂酸等上述 9 个待测成分的 RRT 的影响。
          峰面积的RSD均小于2.00%（n＝6），表明供试品溶液在
                                                              结果显示，9个待测成分的RRT分别为0.332 0、0.405 2、
          室温下放置24 h内稳定性良好。
                                                              0.563 9、0.653 8、0.699 9、0.794 8、1.041 9、1.203 2 和
          2.3.6  加样回收率试验         取已知待测成分含量的固肾
                                                              1.380 6，RSD均小于2.00%（n＝6）。
          定喘丸样品（编号S1）适量，研细，分别取9份，每份精密
                                                              2.5 含量测定
          称定 1.5 g，均分成 3 组，每组分别精密加入混合对照品
                                                                  取 15 批固肾定喘丸样品（编号 S1～S15），分别按
          溶液（肉桂酸、桂皮醛、大车前苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花                         “2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件
          糖苷、木通苯乙醇苷B、补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂                          进样测定，记录峰面积，分别采用外标法和 QAMS 法计
          异黄酮和补骨脂二氢黄酮的质量浓度分别为 0.107、                          算样品中上述 10 个待测成分的含量（表 2）。采用 SPSS
          0.351、0.232、1.427、0.278、0.072、0.931、0.709、0.435 和   26.0软件进行t检验，比较2种方法检测结果的差异。结果
          0.379 mg/mL）0.8、1.0、1.2 mL，按“2.2.2”项下方法制备           显示，2种方法的检测结果差异无统计学意义（P＞0.05）。
          供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰                         2.6 固肾定喘丸化学模式识别分析方法的建立
          面积并计算加样回收率。结果显示，肉桂酸等上述10个                           2.6.1  聚类分析     将“2.5”项下15批固肾定喘丸中10个
          待测成分的平均加样回收率为 96.98%～100.09%，RSD                    待测成分QAMS法含量数据导入SPSS 26.0软件进行聚
          均小于2.00%（n＝9），表明方法准确度良好。                            类分析（cluster analysis，CA）。结果显示，当欧氏距离为


          ·2232·   China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 18                                 中国药房    2022年第33卷第18期
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