Page 56 - 《中国药房》2022年16期

r/min离心5 min，取上清液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取 64 14
60
续滤液，即得。 56 17
52
48
2.1.4 精密度试验 取茶芎样品（编号 S1）粉末，按 44
40
“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱 U/mV 36 13
32
条件连续进样测定6次，以Z-藁本内酯（峰形、分离度均 28 7
24
20 1 2 9
较好且响应较强，下同）为参照，计算各共有峰的相对保 16
12
8
留时间和相对峰面积。结果显示，各共有峰相对保留时 4
0
间和相对峰面积的 RSD 均小于 3.0％（n＝6），表明方法 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72
精密度良好。 t/min
1：绿原酸；2：阿魏酸；7：洋川芎内酯Ⅰ；9：阿魏酸松柏酯；13：E-藁
2.1.5 重复性试验 取茶芎样品（编号S1）粉末6份，分
本内酯；14：洋川芎内酯A；17：Z-藁本内酯
别按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下 图2 混合对照品溶液的HPLC图
色谱条件进样测定，以 Z-藁本内酯为参照，计算各共有
2.1.9 相似度评价 使用《中药色谱指纹图谱相似度评
峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，各共有峰
价系统（2012 版）》，以对照指纹图谱为参照，对 12 批茶
相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均小于 3.0％（n＝
芎样品进行相似度评价。结果显示，S1～S12 批样品与
6），表明方法重复性良好。
对 照 指 纹 图 谱 的 相 似 度 分 别 为 0.997、1.000、0.999、
2.1.6 稳定性试验 取茶芎样品（编号 S1）粉末，按
0.997、0.998、0.998、1.000、0.998、0.989、0.989、0.991、
“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，分别于室温下放置0、
2、4、8、12、24 h 时按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，以 0.990，均大于0.980，提示不同产地茶芎样品的相似性较
Z-藁本内酯为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相 好，质量相对稳定。其中，武宁茶芎（S1～S5）的相似度
对峰面积。结果显示，各共有峰相对保留时间和相对峰 为0.997～1.000，瑞昌茶芎（S6～S8）的相似度为0.998～
面积的 RSD 均小于 3.0％（n＝6），说明该供试品溶液在 1.000，德安茶芎（S9～S12）的相似度为 0.989～0.991。
室温下放置24 h内稳定性良好。 整体上，武宁茶芎（S1～S5）与瑞昌茶芎（S6～S8）的相似
2.1.7 指纹图谱的建立 取12批茶芎样品，按“2.1.3”项 度接近，提示两者化学成分相似；此外，武宁、瑞昌茶芎
下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱条件进样 的相似度均稍高于德安茶芎（S9～S12），提示德安茶芎
测定，记录HPLC图并以“AIA”格式导入《中药色谱指纹 的化学成分可能与前两者有所不同。
图谱相似度评价系统（2012版）》。以S7样品图谱（所含 2.2 茶芎样品的CA
色谱信息丰富且各共有峰的分离度均较好）为参照，经 本研究以12批茶芎样品17个共有峰的绝对峰面积
多点校正、Mark 峰匹配后，生成茶芎 HPLC 叠加指纹图 为变量，使用SPSS 22.0软件进行Z-score标准化处理后，
谱和对照指纹图谱（R），详见图1。 采用平方欧氏距离为测度，以组间连接法进行CA，结果
17
10
14
640 1 2 3 4 5 6 78 9 11 12 13 15 16 见图3。由图3可知，当平方欧氏距离为20时，12批茶芎
600 R
560 S12 样品可被分为 3 类，S1～S5（武宁茶芎）聚为一类，S6～
520 S11
480
440 S10 S8（瑞昌茶芎）聚为一类，S9～S12（德安茶芎）聚为一
400 S9
360
U/mV 320 S8 类。由此可以看出，不同产地茶芎样品具有较明显的聚
S7
280
240 S6 类趋势。当平方欧氏距离为 24 时，S1～S5（武宁茶芎）
200 S5
160 S4
120 可与S6～S8（瑞昌茶芎）聚为一类，S9～S12（德安茶芎）
80 S3
40 S2 聚为一类，与茶芎HPLC指纹图谱相似度评价结果基本
0 S1
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 一致。
t/min
图1 12批茶芎样品的HPLC叠加指纹图谱和对照指纹 平方欧氏距离
0 5 10 15 20 25
图谱 S11
S12
S9
2.1.8 共有峰的确定及指认 采用 Mark 峰匹配，共得 S10
到 17 个共有峰。通过查阅相关文献 [11－12] 并比对混合对 S4
S5
S1
照品色谱图（图 2），初步确定 1 号峰为绿原酸、2 号峰为 S3
S2
阿魏酸、7号峰为洋川芎内酯Ⅰ、9号峰为阿魏酸松柏酯、 S6
S7
13号峰为E-藁本内酯、14号峰为洋川芎内酯A、17号峰 S8
为Z-藁本内酯。 图3 12批茶芎样品的CA树状图
·1970 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16 中国药房 2022年第33卷第16期