Page 51 - 《中国药房》2022年16期

其相对保留时间的RSD均大于5％，利用相对保留时间 下避光静置 20 min，在 517 nm 波长下测定吸光度，依次
值法对没食子酸和原儿茶酸准确定位较为困难；而二者 记为A0 （空白组）、A1 （样品组）和A2 （对照组）。按下式计
相对保留时间差的RSD均小于5％，表明二者可利用相 算自由基清除率：自由基清除率＝[1－（A1－A2 ）/A0]×
对保留时间差值法进行准确定位，此外还可结合二者的 100％。结果见表4。
紫外吸收特征对色谱峰进行定位。 表4 23批地稔药材的抗氧化活性测定结果（n＝4）
2.5 地稔中6种成分含量的测定 编号 DPPH自由基清除率/％ ABTS自由基清除率/％ FRAP值/（mmoL/L）
DR01 61.69 57.72 0.34
取23批地稔药材，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶
DR02 47.90 36.81 0.22
液，再按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积。以 DR03 55.92 44.83 0.25
牡荆素为内参物，通过fs/i分别计算没食子酸、原儿茶酸、 DR04 45.18 47.85 0.26
DR05 52.72 55.88 0.33
异牡荆素、芦丁、鞣花酸的含量，同时采用外标法计算没
DR06 39.18 37.23 0.21
食子酸、原儿茶酸、牡荆素、异牡荆素、芦丁、鞣花酸的含 DR07 58.78 50.43 0.34
量。采用SPSS 25.0软件对外标法与QAMS法的含量测 DR08 38.60 40.23 0.21
DR09 71.91 65.85 0.38
定结果进行独立样本t检验。平行2份操作，取平均值， DR10 74.31 63.55 0.39
结果见表3。 DR11 64.93 56.34 0.35
表3 23批地稔药材中6种成分外标法与QAMS法的含 DR12 50.64 46.17 0.25
DR13 69.08 69.87 0.45
量测定结果（n＝2，％％） DR14 72.20 62.38 0.37
没食子酸 原儿茶酸 异牡荆素 芦丁 鞣花酸 DR15 68.41 60.22 0.35
药材 牡荆素 DR16 64.98 65.09 0.40
编号 （外标法） 外标 QAMS 外标 QAMS 外标 QAMS 外标 QAMS 外标 QAMS
法 法 法 法 法 法 法 法 法 法 DR17 59.42 56.60 0.32
DR01 0.133 0.022 0.022 0.009 0.008 0.190 0.198 0.082 0.082 0.015 0.014 DR18 58.80 57.73 0.31
DR02 0.089 0.024 0.024 0.007 0.007 0.143 0.149 0.045 0.045 0.014 0.012 DR19 62.42 57.68 0.35
DR03 0.023 0.024 0.024 0.008 0.008 0.129 0.134 0.038 0.038 0.016 0.015 DR20 57.19 55.35 0.31
DR04 0.064 0.014 0.014 0.006 0.006 0.126 0.130 0.057 0.056 0.009 0.008 DR21 38.94 45.55 0.25
DR05 0.113 0.012 0.012 0.006 0.006 0.191 0.199 0.031 0.031 0.014 0.013 DR22 50.84 53.06 0.29
DR06 0.038 0.031 0.031 0.008 0.008 0.127 0.132 0.045 0.044 0.012 0.011 DR23 40.80 57.72 0.22
DR07 0.121 0.019 0.019 0.006 0.006 0.175 0.182 0.064 0.063 0.020 0.018 2.6.2 ABTS 自由基清除法 参考文献[12]的方法制备
DR08 0.088 0.026 0.025 0.018 0.018 0.138 0.144 0.037 0.037 0.013 0.012 2，2′-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐
DR09 0.149 0.020 0.020 0.006 0.006 0.234 0.243 0.111 0.110 0.022 0.020
DR10 0.182 0.032 0.032 0.012 0.012 0.273 0.283 0.125 0.125 0.023 0.021 （ABTS）法工作液。取“2.2.2”项下供试品溶液，用 75％
DR11 0.132 0.021 0.021 0.010 0.010 0.194 0.201 0.062 0.062 0.022 0.020 甲醇稀释 100 倍，得到生药质量浓度为 0.4 mg/mL 的供
DR12 0.107 0.032 0.032 0.010 0.010 0.160 0.167 0.104 0.104 0.013 0.011 试品溶液。将96孔板分为空白组、样品组、对照组，每组
DR13 0.133 0.015 0.015 0.007 0.007 0.193 0.201 0.141 0.140 0.012 0.011
DR14 0.100 0.009 0.009 0.005 0.005 0.168 0.175 0.062 0.061 0.010 0.009 设置 4 个平行样。空白组加入 75％甲醇溶液 20 μL+
DR15 0.110 0.013 0.013 0.004 0.004 0.177 0.184 0.062 0.061 0.011 0.010 ABTS 工作液 180 μL，样品组加入供试品溶液 20 μL+
DR16 0.130 0.012 0.012 0.004 0.004 0.202 0.210 0.094 0.093 0.013 0.012 ABTS工作液180 μL，对照组加入供试品溶液20 μL+水
DR17 0.079 0.008 0.008 0.003 0.003 0.134 0.139 0.072 0.071 0.008 0.007
DR18 0.050 0.017 0.017 0.007 0.007 0.107 0.112 0.065 0.064 0.013 0.010 180 μL。3 组样品均于室温下避光静置 30 min，在 734
DR19 0.116 0.017 0.016 0.009 0.009 0.174 0.182 0.101 0.100 0.014 0.011 nm 波长下测定吸光度，依次记为 A0 （空白组）、A1 （样品
DR20 0.021 0.013 0.013 0.006 0.006 0.068 0.071 0.013 0.013 0.007 0.006 组）和 A2 （对照组）。按“2.6.1”项下公式计算 ABTS 自由
DR21 0.065 0.015 0.015 0.009 0.009 0.111 0.116 0.017 0.016 0.011 0.009 基清除率。结果见表4。
DR22 0.046 0.012 0.012 0.008 0.008 0.089 0.093 0.023 0.023 0.009 0.007
DR23 0.157 0.041 0.042 0.023 0.023 0.228 0.239 0.052 0.052 0.016 0.015 2.6.3 FRAP法 参考文献[13]的方法制备铁离子还原/
t 0.017 0.033 －0.452 0.052 1.186 抗 氧 化 能 力（ferric ion reducing/antioxidant power，
P 0.986 0.974 0.654 0.959 0.242
FRAP）工作液。将96孔板分为样品组和空白组，每组设
2.6 地稔抗氧化活性的测定
置4个平行样。样品组加入“2.6.2”项下生药质量浓度为
2.6.1 DPPH 自由基清除法 参考文献[12]的方法制备 0.4 mg/mL 的供试品溶液 20 μL+FRAP 工作液 180 μL，
1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）工作液。取“2.2.2”项 空白组加入75％甲醇20 μL+FRAP工作液180 μL。2组
下供试品溶液，用 75％甲醇稀释 200 倍，得到生药质量 样品均于 37 ℃下静置 10 min，在 593 nm 波长下测定吸
浓度为 0.2 mg/mL 的供试品溶液。将 96 孔板分为空白 光度，分别记为Ai （样品组）、Aj （空白组）。另分别配制浓
组、样品组、对照组，每组设置4个平行样。空白组加入 度为 0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mmoL/L 的硫酸亚
75％甲醇溶液100 μL+DPPH工作液100 μL，样品组加入 铁溶液，按上述方法测定吸光度后绘制标准曲线。将供
供试品溶液100 μL+DPPH工作液100 μL，对照组加入供 试品溶液的吸光度（Ai－Aj ）代入标准曲线方程计算对应
试品溶液 100 μL+75％甲醇 100 μL。3 组样品均于室温 的硫酸亚铁浓度，记为“FRAP值”。结果见表4。

中国药房 2022年第33卷第16期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16 ·1965 ·