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2.3 方法学验证                                           分的含量。结果显示，没食子酸、原儿茶酸、牡荆素、异
        2.3.1  专属性考察       分别精密量取空白溶剂（75％甲                  牡 荆 素 、芦 丁 、鞣 花 酸 含 量 的 RSD 分 别 为 2.06％ 、
        醇）、混合对照品溶液、供试品溶液各 0.8 μL，按“2.1”项                    1.64％、1.57％、2.36％、2.93％、2.49％（n＝6），表明该方
        下色谱条件进样分析，记录色谱图。结果显示，空白溶                            法重复性良好。
        剂对6种待测成分的检测无干扰，方法专属性好。色谱                            2.3.6  加样回收率试验          取同一批地稔药材（编号
        图见图1（空白溶剂图略）。                                       DR23）6 份，每份 0.5 g，精密称定，分别加入与地稔中各
                                                            成分含量相当的对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供
            20
                                                            试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面
            mAU  10  1   2                   3  4  6        积并计算加样回收率。结果显示，没食子酸、原儿茶酸、

                                                  5
             0                                              牡荆素、异牡荆素、芦丁、鞣花酸的平均加样回收率分别
              0   5   10  15  20  25  30  35  40  45        为 97.79％ 、100.18％ 、97.84％ 、96.45％ 、91.84％ 、
                                 t/min
                            A.混合对照品溶液                       108.06％，RSD 分别为 1.71％、2.32％、1.41％、1.48％、
            80                                              1.20％、6.66％（n＝6），表明该方法准确度较好。
            60                                              2.4 QAMS法的建立
            mAU  40
            20      1    2                   3  4  5  6     2.4.1 fs/i的计算   分别精密吸取“2.3.2”项下的系列混
             0
                                                            合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录各
              0   5   10  15  20  25  30  35  40  45
                                 t/min                      成分的峰面积。以牡荆素为内参物，采用多点校正法计
                              B.供试品溶液
                                                            算没食子酸、原儿茶酸、异牡荆素、芦丁、鞣花酸的 fs/i：
            1：没食子酸；2：原儿茶酸；3：牡荆素；4：异牡荆素；5：芦丁；6：鞣
        花酸                                                  fs/i＝（As×ci ）/（cs×Ai ）（As为内参物的峰面积，ci为待测成分
                图1 地稔中6种待测成分的UPLC图                          的质量浓度，cs为内参物的质量浓度，Ai为待测成分的
                                                            峰面积） 。结果显示，没食子酸、原儿茶酸、异牡荆
                                                                    [11]
        2.3.2  线性范围考察        精密吸取“2.2.1”项下各单一对
                                                            素、芦丁、鞣花酸的 fs/i分别为 0.255、0.140、1.038、0.654、
        照品溶液各适量，加甲醇稀释制成6个不同质量浓度的
                                                            0.070，RSD分别为1.46％、1.18％、2.51％、0.91％、3.28％
        系列混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，
                                                           （n＝6）。
        记录峰面积。以各待测对照品的质量浓度（x）为横坐
                                                            2.4.2  不同色谱柱、柱温和流速对 fs/i 的影响               采用
        标、峰面积（y）为纵坐标，进行线性回归。结果见表2。
                                                            Agilent 1290 InfinityⅡ系列 UPLC 仪，考察不同色谱柱
            表2   地稔中6种待测成分的线性关系考察结果
                                                           （Waters ACQUITY UPLC HSS T3、Agilent ZORBAX
         待测成分         回归方程         r        线性范围/（μg/mL）    Eclipse Plus C18、Agilent ZORBAX Stable Bond SB-C18，
         没食子酸       y＝9.474 1x+6.534 2  0.999 7  10.00～40.01
         原儿茶酸       y＝17.538x+4.820 8  0.999 6  7.00～25.12  规 格 均 为 2.1 mm × 100 mm，1.8 μ m）、柱 温（25、30、
         牡荆素        y＝2.427 5x+5.135 4  0.999 6  40.00～90.00  35 ℃）、流速（0.18、0.20、0.22 mL/min）对各成分 fs/i的影
         异牡荆素       y＝2.437 7x－5.282 6  0.999 1  20.00～115.00
         芦丁         y＝3.776 6x+1.244 8  0.999 9  10.03～50.10  响。结果显示，在不同色谱柱、柱温和流速下，没食子
         鞣花酸        y＝37.312x－13.355  0.999 6  5.97～19.80   酸、原儿茶酸、异牡荆素、芦丁、鞣花酸的平均 fs/i分别为
        2.3.3  精密度试验       精密吸取“2.3.2”项下线性范围下               0.259、0.141、1.061、0.616、0.076，RSD 分 别 为 0.72％ 、
        限浓度的混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进                         0.83％、0.73％、1.07％、1.48％（n＝9），表明不同色谱柱、
        样6次，记录峰面积。结果显示，没食子酸、原儿茶酸、牡                          柱温和流速对5种待测成分的fs/i无明显影响。
        荆素、异牡荆素、芦丁、鞣花酸峰面积的 RSD 分别为                          2.4.3  不同色谱柱、柱温和流速对相对保留时间和相对
        0.36％、0.28％、0.64％、0.29％、0.20％、0.69％（n＝6），表          保留时间差的影响           以牡荆素为内参物，计算没食子
        明仪器精密度良好。                                           酸、原儿茶酸、异牡荆素、芦丁、鞣花酸的相对保留时间
        2.3.4  稳 定 性 试 验     精 密 吸 取 供 试 品 溶 液（编 号          和相对保留时间差，考察“2.4.2”项下不同色谱柱、柱温、
        DR23），分别于室温放置 2、4、6、8、10、24 h 时按“2.1”项              流速对相对保留时间和相对保留时间差的影响。结果
        下色谱条件进样分析，记录峰面积。结果显示，没食子                            显示，5种成分的平均相对保留时间分别为0.175、0.336、
        酸、原儿茶酸、牡荆素、异牡荆素、芦丁、鞣花酸峰面积的                          1.092、1.166、1.215，RSD分别为10.27％、7.27％、0.96％、
        RSD 分 别 为 0.27％ 、0.38％ 、0.56％ 、0.60％ 、0.29％ 、       1.40％、1.99％（n＝9）；平均相对保留时间差分别为－
        2.96％（n＝6），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。                      25.628、－ 31.860、3.546、6.439、8.344，RSD 分 别 为
        2.3.5  重复性试验       取同一批地稔药材（编号 DR23）6               1.70％、1.89％、13.95％、12.76％、13.77％。可见，异牡荆
        份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色                     素、芦丁、鞣花酸均可利用相对保留时间值法进行准确
        谱条件进样分析，记录峰面积，代入回归方程计算各成                            定位。由于没食子酸和原儿茶酸的相对保留时间偏小，


        ·1964 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16                                 中国药房    2022年第33卷第16期
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