Page 18 - 《中国药房》2022年16期
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研究表明，心血管疾病与炎症密切相关，动脉粥样                          中 D2 有粉末析出；采用反相半制备液相色谱对该粉末
        硬化、高血压、心力衰竭和心肌病等的发病过程都有炎                            进行分离，用乙腈-水（乙腈30％→70％）进行梯度洗脱，
        症因子的参与 。参附注射液是临床上常用的中成药，                            制备得到化合物 1（8.5 mg）、化合物 2（12.2 mg）和化合
                     [1]
        常用于血管性疾病的治疗，如心力衰竭、心律失常、休                            物3（11.0 mg）。E部位（18.0 g）经中压液相色谱分离，用
        克、缺血再灌注损伤、心肌梗死、脑梗死、血管性痴呆、缺                          甲醇-水（甲醇50％→100％）进行梯度洗脱，通过薄层色
        血缺氧性脑病、血栓闭塞性脉管炎、下肢深静脉血栓                             谱检视，合并相似流分，减压浓缩，最后得到 12 个流分
        等 。目前关于参附注射液的化学成分研究主要集中于                           （E1～E12）。取E3（58.0 mg）经反相半制备液相色谱，以
          [2]
        对参附注射液中的化学成分进行分析及鉴定                     [3－5] ，或对   乙腈-水（20 ∶ 80，V/V）为流动相分离得到化合物 7（1.2
        其中主要成分人参皂苷进行含量测定                 [6－8] 。为进一步明       mg）。取E4（251.0 mg）经反相制备液相色谱，以甲醇-水
        确参附注射液的药效物质基础，本课题组对参附注射液                           （70 ∶ 30，V/V）为流动相分离得到化合物 9（1.2 mg）。取
        开展了系统研究，采用大孔吸附树脂、中压液相色谱、制                           E7（428.0 mg）经反相制备液相色谱，以甲醇-水（87 ∶ 13，
        备薄层色谱和反相半制备高效液相色谱等方法进行分                             V/V）为流动相分离得到 6 个流分（E7-1～E7-6）。其中
        离纯化，从参附注射液中分离鉴定出12个化合物，并对                           E7-2经反相制备液相色谱，以乙腈-水（80 ∶ 20，V/V）为流
        其中的炔醇类化合物进行了抗炎活性研究，现报道如下。                           动 相 分 离 得 到 5 个 流 分（E7-2-1～E7-2-5）；E7-2-2 和
        1 材料                                                E7-2-5 进一步通过反相半制备液相色谱，分别以乙腈-水
        1.1 主要仪器                                           （70∶30，V/V）和乙腈-水（68 ∶ 32，V/V）为流动相分离得到
            本研究所用主要仪器有 Bruker-600 型核磁共振                     化合物 11（1.4 mg）和化合物 12（2.2 mg）。E7-6 通过反
        （NMR）波谱仪、离子淌度质谱仪（德国 Bruker 公司），                     相半制备液相色谱，以乙腈-水（72 ∶ 28，V/V）为流动相制
        Synapt G2 HDMS 型高分辨质谱仪（美国 Waters 公司），               备得到化合物 10（2.1 mg）。E11（162.0 mg）经反相制备
        LTQ-XL 型线性离子阱质谱仪、Series Ⅱ Water Jacketed            液相色谱，以甲醇-水（90 ∶ 10，V/V）为流动相分离得到 3
        型CO2孵箱（美国Thermo Fisher Scientific公司），1220型          个流分（E11-1～E11-3）；E11-1 进一步通过反相半制备
        半制备型高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司），Power-                   液相色谱，以乙腈-水（70 ∶ 30，V/V）为流动相分离得到化
        Pac Basic型基础电泳仪（美国Bio-rad公司），Tanon 5200             合物4（1.1 mg）；E11-3经反相半制备液相色谱，以乙腈-
        型显影仪（上海天能科技有限公司）等。                                  水（72 ∶ 28，V/V）为流动相不断纯化得到化合物 5（2.5
        1.2  主要药品与试剂                                        mg）和化合物 6（2.3 mg）。E12（47.0 mg）经制备薄层色
            参附注射液提取物（批号18100361002）购自华润三                    谱和反相半制备液相色谱，分别以二氯甲烷-甲醇（5 ∶ 1，
        九（雅安）药业有限公司。柱层析硅胶（批号 2202173，规                      V/V）和甲醇-水（90 ∶ 10，V/V）为流动相分离得到化合
        格200～300目）购自青岛海浪硅胶干燥剂厂；脂多糖（批                        物 8（3.4 mg）。
        号 0000114327）购自美国 Sigma 公司；一氧化氮试剂盒                  2.2  结构鉴定
        （批号 070821220411）购自南京建成生物工程研究所；                         化合物 1：白色粉末。高分辨电喷雾离子化质谱
                                                                                                        +
        DMEM 培养基（批号 8122126）购自美国 Gibco 公司；超                （HR-ESI-MS）显示质荷比（m/z）为823.481 7[M+Na]（计
        灵敏化学发光检测试剂盒（批号 4AE242220FGE）购自                      算值 823.482 0，C42H72NaO14 ），推测化合物的分子式为
        北京四正柏生物科技有限公司；兔源β-actin 抗体（批号                       C42H72O14。 H-NMR（C5D5N，600 MHz）显示 8 个甲基质
                                                                     1
        GTX19639）购自美国 GeneTex 公司；兔源环氧合酶-2                   子信号：δ H 2.10（3H，s，H3-28），1.64（3H，s，H3-21），1.61
        （cyclooxygenase-2，COX-2）抗体（批号 AF1924）购自上           （3H，s，H3-26 或 H3-27），1.62（3H，s，H3-26 或 H3-27），1.60
        海碧云天生物技术有限公司；辣根过氧化物酶标记的山                           （3H，s，H3-29），1.18（3H，s，H3-18），1.06（3H，s，H3-19），
        羊抗兔 IgG（H+L）（批号 219761108）购自北京中杉金桥                  0.83（3H，s，H3-30）；2个糖端基质子信号：δ H 5.20（1H，d，
        生物技术有限公司。                                           J＝7.8 Hz，H-1″），5.06（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′）；1个烯氢
        1.3 实验细胞                                            信号：δ H 5.26（1H，t，J＝7.2 Hz，H-24）。 C-NMR（C5D5N，
                                                                                             13
            RAW264.7 细胞购自上海中乔新舟生物科技有限                       150 MHz）中δ C：39.8（C-1），28.3（C-2），79.0（C-3），40.7
        公司。                                                （C-4），61.7（C-5），80.1（C-6），45.5（C-7），41.5（C-8），50.4
        2 方法与结果                                            （C-9），40.0（C-10），31.3（C-11），70.5（C-12），49.5
        2.1 提取与分离                                          （C-13），51.7（C-14），31.0（C-15），27.0（C-16），51.8
            以参附注射液提取物（260 g）为原料，经 D101 大孔                  （C-17），18.1（C-18），17.9（C-19），83.6（C-20），22.6
        吸附树脂上样吸附，依次用纯水和 10％、30％、50％、                       （C-21），36.5（C-22），23.5（C-23），126.3（C-24），131.3
        70％、90％乙醇洗脱，得到不同乙醇洗脱部位（A～F）。                       （C-25），26.1（C-26），18.1（C-27），32.1（C-28），16.7（C-29），
        D 部位（12.6 g）经中压液相色谱分离，用甲醇-水（甲醇                      17.5（C-30），6-Glc-C-1′～6-Glc-C-6′（106.3，75.8，80.5，
        30％→80％）进行梯度洗脱，得到5个馏分（D1～D5），其                      72.2，78.6，63.4），20-Glc-C-1″～20-Glc-C-6″（98.6，75.5，


        ·1932 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 16                                 中国药房    2022年第33卷第16期
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