Page 63 - 《中国药房》2022年15期
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但难以逆转RF过程。                                         （福州飞净生物科技有限公司，批号分别为 PH1779、
            中医学将 CKD 归属为“水肿、虚劳、癃闭、关格”范                     190805、20211009），肌酐（creatinine，Cr）检测试剂盒、尿
        畴。CKD迁延日久，或失治误治，即进展成RF，故RF病                        素氮（blood urea nitrogen，BUN）检测试剂盒（南京建成
        机多为本虚标实——以脾肾虚损为本虚，以浊毒、湿热、                          生 物 工 程 研 究 所 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 C011-1-1、
        瘀血为标实，故中医治疗当以补气、温阳、滋阴养血为                           C013-1-1），兔SP试剂盒、DAB显色试剂盒（北京中杉金
          [6]
        主 。金匮肾气丸出自《金匮要略》，有“千古补肾之组                          桥生物技术有限公司，批号分别为SP-9001、ZLI-9018），
        方”之称，可调节机体免疫功能、清除氧自由基、抗氧化、                         兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗体、兔抗大鼠Smad2多克隆抗
                           [7]
        抗纤维化，且效果显著 。考虑到金匮肾气丸补益肾气                           体、兔抗大鼠Smad3多克隆抗体、兔抗大鼠ERK1多克隆
        的作用符合 RF 的中医治疗思路，因此本研究选用金匮                         抗体、兔抗大鼠ERK2多克隆抗体（武汉赛维尔生物科技
        肾气丸对 RF 模型大鼠进行干预，以秋水仙碱为阳性对                         有限公司，批号分别为 GB11179、GB11511、GB111844、
        照药物，观察金匮肾气丸对RF模型大鼠肾功能、病理学                          GB13003、GB11370-1）；其余试剂为实验室常用规格，水
        形态及纤维化的影响。                                         为纯净水。
            相关研究发现，金匮肾气丸可通过抑制单侧输尿管                         1.3 动物
        梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）模型大鼠α-平         本研究所用动物为健康 SD 雄性大鼠，8 周龄，体质
        滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）表达，改            量 180～200 g，购自郑州市惠济区华兴实验动物养殖
        善肾功能；还可通过降低基质金属蛋白酶抑制剂的活                            场，动物生产许可证号为SCXK（豫）2019-0002。实验期
        性、升高基质金属蛋白酶的活性来减少肾间质胶原物质                           间 动 物 饲 养 室 环 境 温 度 为 20～22 ℃ ，相 对 湿 度 为
        的沉积 ，而基质金属蛋白酶系的活性调节均与转化生                           55％～60％，正常光照，大鼠自由饮水采食。本研究经
              [8]
        长 因 子 β 1 （transforming growth factor，TGF-β 1 ）有 关 。  河 南 中 医 药 大 学 动 物 伦 理 委 员 会 批 准（批 准 号 为
        TGF-β 1是目前公认的致纤维化因子之一，可增加 ECM                      DWLL20180018），实验过程及动物处置严格遵守“3R”
        合成并抑制其降解，使肾脏细胞与基质的黏附增加，从                           原则。
        而导致肾脏固有细胞凋亡及炎症细胞浸润。TGF-β 1主                        2 方法
        要通过 Smad 依赖及非依赖的胞外信号调节激酶（extra-                    2.1  分组、造模与给药
        cellular signal-regulated protein kinases，ERK）通路这2个    取雄性 SD 大鼠 53 只，适应性饲养 1 周后，按 250
                           [9]
        途径协同诱导RF过程 ，而抑制TGF-β 1及其介导的信号                      mg/kg灌胃腺嘌呤混悬液（以0.1％ CMC-Na溶液溶解），
        通路就可以延缓甚至逆转 RF 过程。基于以上研究基                          每天 1 次，连续 15 d；然后改为隔日 1 次，连续 15 d。第
        础，考虑到中药具有作用于多靶点和通路的特点，本研                           31 天随机取 3 只大鼠腹腔注射 1 g/kg 氨基甲酸乙酯麻
        究将通过 TGF-β 1/Smads和 TGF-β 1/ERK这 2 条信号通路           醉，取腹主动脉血检测 Cr、BUN 水平，并剖取肾脏做常
        来探讨金匮肾气丸对 RF 模型大鼠的干预作用及机制，                         规病理检查。若大鼠血清中Cr、BUN水平升高，且显微
        以期为金匮肾气丸治疗RF提供实验依据。                                镜下肾组织的纤维化及炎症细胞浸润明显，则提示 RF
        1 材料                                               模型构建成功 。将 50 只造模成功的大鼠按体质量随
                                                                        [4]
        1.1  主要仪器                                          机分为模型组、秋水仙碱片组和金匮肾气丸低、中、高剂
            本研究所用的主要仪器有 BS110S 型电子天平（北                     量组，每组10只；另取10只未造模大鼠作为正常组。金
        京赛多利斯天平有限公司），MR-96TB型酶标仪[骋克仪                       匮肾气丸、秋水仙碱片的人口服剂量分别为每天10 g、5
        器（上海）有限公司]，RM2235型石蜡切片机（德国Leica                    mg，经折算后，得金匮肾气丸、秋水仙碱片在大鼠中的用
        公司），D3024R 型台式高速冷冻型微量离心机[大龙兴                       量分别为 1 g/kg、0.45 mg/kg。基于此，本实验以折算剂
        创实验仪器（北京）股份公司]，YD-6D 型组织包埋机、                       量 1 g/kg 为金匮肾气丸中剂量；以 0.5、2 g/kg（折算剂量
        YD-A 型组织摊片机、YD-B 型组织烤片机（金华市科迪                      的 1/2、2 倍）为金匮肾气丸低、高剂量；以 0.45 mg/kg 为
        仪器设备有限公司），CX23型光学显微镜（日本Olympus                     秋水仙碱片剂量。以上药物均灌胃给药，灌胃体积为
        公司），Stepone plus 型荧光定量聚合酶链式反应（poly-                10 mL/kg；正 常 组 和 模 型 组 大 鼠 灌 胃 等 体 积 0.1％
        merase chain reaction，PCR）仪（美国ABI公司）。              CMC-Na溶液，每天1次，连续30 d。
        1.2 主要药品与试剂                                        2.2 取材及处理
            本研究所用主要药品与试剂有金匮肾气丸（北京同                             末次灌胃 24 h 后，各组大鼠称质量后腹腔注射 1
        仁堂科技发展股份有限公司制药厂，批号 19032632，规                      g/kg 氨基甲酸乙酯麻醉，取腹主动脉血，以 3 000 r/min
        格 0.2 g/粒），秋水仙碱片（西双版纳版纳药业有限责任                      离心10 min，吸取上清液于－80 ℃条件下储存。剖取肾
        公司，批号 190704，规格 0.5 mg/片），羧甲基纤维素钠                  脏，去除肾脏周围结缔组织，以生理盐水洗涤，观察肾脏
       （CMC-Na，国 药 集 团 化 学 试 剂 有 限 公 司 ，批 号                外观形态，用滤纸吸尽肾脏表面液体后使用电子天平称
        20160704），氨基甲酸乙酯（天津市光复科技发展有限公                      量；然后将肾脏组织一分为二，其中一份用4％多聚甲醛
        司，批号20210902），腺嘌呤、苏木素染色液、伊红染色液                     固定，另一份用液氮速冻后于－80 ℃条件下保存。


        中国药房    2022年第33卷第15期                                             China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 15  ·1849 ·
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