Page 20 - 《中国药房》2022年12期
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LncRNA and target genes，and verified by real-time quantitative PCR. RESULTS Compared with model group 1，the brain tissue
        pathological damages were significantly improved in Zhilong huoxue tongyu capsule low-dose and high-dose groups，and the IL-1β，
        TNF-α protein and mRNA expression in brain tissue were significantly decreased （P＜0.05）. Two effective LncRNAs were
        screened out. The results of in vivo verification test（LncRNA-Dlst-211 was highly expressed in model group 2，and significantly
        down-regulated after the intervention of Zhilong huoxue tongyu capsules； LncRNA-Dlst-211 target genes Rps6kl1 and
        LncRNA-MSTRG.8169.4 were expressed weakly in model group 2，and strongly up-regulated after intervention）were consistent
        with the sequencing results. CONCLUSIONS Zhilong huoxue tongyu capsules can improve the brain injury and inflammatory
        response in intracerebral hemorrhage model mice，and its mechanism may be related to down-regulating the expression of
        LncRNA-Dlst-211 and up-regulating the expression of LncRNA-MSTRG.8169.4 and Rps6kl1.
        KEYWORDS     Zhilong huoxue tongyu capsules；intracerebral hemorrhage；inflammation；long non-coding RNA；transcriptome
        sequencing


            脑出血（intracerebral hemorrhage，ICH）是常见的脑          Olympus 公司），NanoDrop 2000 型超微量分光光度计
        卒中类型之一，发病率仅次于脑梗死，具有极高的致残                           （美国Thermo Fisher Scientific公司）等。
                   [1]
        率和致死率 。据研究统计，患者脑卒中后 1 年的病死                          1.2 主要药品和试剂
        率接近60％，仅有20％的患者在脑卒中6个月后能存活                              蛭龙活血通瘀胶囊（批号 20180216，规格 0.4 g/粒）
                   [2]
                                            [3]
        并独立生活 ，且男性发病率远高于女性 。可见，脑卒                           由西南医科大学附属中医医院制剂室制备；Ⅶ型胶原酶
        中已严重威胁患者的生命安全，影响患者及其家属的生                           （批号 C0773）购自美国 Sigma 公司；cDNA 逆转录试剂
        活质量。ICH 由脑组织出血引起，并可由高血压、动静                         （批号 R323-01）、荧光定量 PCR 试剂（批号 Q711-03）均
        脉畸形或头部外伤导致，其病理生理学特征为严重的炎                            购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司；苏木精-伊红
        症、铁毒性、水肿、氧化应激和凝血酶形成 。蛭龙活血                           染色试剂盒（批号 C0105）和尼氏染色试剂盒（批号
                                             [4]
        通瘀胶囊由水蛭、地龙、大血藤、黄芪、桂枝等药材组成，                          C0117）均购自上海碧云天生物技术有限公司；免疫组化
        是西南医科大学附属中医医院研制的院内制剂，被广泛                            试剂盒（批号 PV-9000）和 3，3′-二氨基联苯胺（批号
                                                            ZLI-9017）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司；小
        用于ICH的临床治疗，效果明显             [5－6] 。此外，多项动物实
                                                            鼠白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、肿瘤坏死因子α
        验研究亦发现，蛭龙活血通瘀胶囊能有效改善大鼠/小鼠
                                                           （tumor necrosis factor-α，TNF-α）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶
        ICH 导致的脑损伤，具有显著的脑保护作用                 [7－9] 。然而，
                                                           （glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）单
        蛭龙活血通瘀胶囊干预 ICH 的具体作用机制尚不明
                                                            克隆抗体（批号分别为sc-52012、sc-52746、sc-365062）均
        确 。 近 年 来 研 究 发 现 ，部 分 长 链 非 编 码 RNA（long
                                                            购自美国 Santa Cruz 公司；辣根过氧化物酶标记的山羊
        non-coding RNA，LncRNA）参与了染色体沉默、基因组
                                                            抗小鼠免疫球蛋白G二抗（批号31430）和Trizol总RNA
        印记、染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多
                                                            抽提试剂（批号 15596026）均购自美国 Invitrogen 公司；
        个重要的调控过程         [10－12] ，且在中枢神经系统损伤中扮演
                                                            考马斯亮蓝（批号B104237）购自上海阿拉丁生化科技股
                                                [13]
        关键角色，如诱导ICH后细胞自噬和神经炎症 。本研
                                                            份有限公司；SuperSignal    TM  West Pico PLUS 高敏发光液
        究拟采用尾状核注射胶原酶以建立ICH小鼠模型，先考
                                                           （批号 pierce34580）购自美国 Thermo Fisher Scientific 公
        察蛭龙活血通瘀胶囊对小鼠ICH的影响，再通过转录组
                                                            司；其余试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
        测序分析差异LncRNA并进行基因本体（gene ontology，
                                                            1.3 实验动物
        GO）富集，预测有效 LncRNA 和靶基因，最后通过体内
                                                                SPF级雄性C57BL/6小鼠33只，8周龄，购自成都药
        实验进行验证，旨在为明确蛭龙活血通瘀胶囊改善ICH
                                                            康生物科技有限公司，动物生产许可证号为 SCXK
        后脑损伤的作用机制提供参考。                                     （川）-2020-034。所有小鼠均饲养于西南医科大学动物
        1 材料                                                实验中心动物房内，温度为20～22 ℃，相对湿度为50％～
        1.1 主要仪器                                            60％，12 h/12 h明暗交替。本实验方案已通过西南医科大
            本研究所用主要仪器包括LightCycler480 Ⅱ型实时                  学实验动物伦理委员会批准，审批编号为20211111-002。
        荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应（polymerase chain reaction，      2 方法
        PCR）仪（瑞士 Roche 公司），Mini-Protein Tetra System 型      2.1 造模
        蛋白质电泳转印系统、ChemiDoc XRS+型凝胶成像系统                          小鼠经腹腔注射 1％戊巴比妥钠麻醉后，头部向上
        （美国 Bio-Rad 公司），RM2255 型组织切片系统（德国                   固定于脑立体定位仪上，于前囟区域备皮，用 75％乙醇
        Leica公司），BX61VS型全自动虚拟切片扫描系统（日本                      消毒，纵向剪开该处皮肤约1 cm，用3％过氧化氢除去骨


        ·1422 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 12                                 中国药房    2022年第33卷第12期
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