Page 22 - 《中国药房》2022年12期

表1 IL-1β等的PCR引物序列及产物长度 排列紊乱；与模型1组比较，蛭龙活血通瘀胶囊低、高剂
基因/LncRNA 引物序列（5′→3′） 产物长度/bp 量组小鼠脑组织病理损伤均有所减轻，其中高剂量组的
IL-1β 上游引物：TGCCACCTTTTGACAGTGATG 220 改善效果更明显。尼氏染色结果（图1）显示，与假手术1
下游引物：AAGGTCCACGGGAAAGACAC
TNF-α 上游引物：CATCTTCTCAAAATTCGAGTGACAA 175 组比较，模型 1 组小鼠神经元大量减少，脑神经损坏严
下游引物：TGGGAGTAGACAAGGTACAACCC 重；与模型1组比较，蛭龙活血通瘀胶囊低、高剂量组小
LncRNA-Dlst-211 上游引物：CCATCAGCAACGGAGGAGTT 131 鼠神经元均有所恢复，其中高剂量组恢复更佳。
下游引物：TCGAACTTCCACCTTGCCTC
LncRNA-MSTRG.8169.4 上游引物：GCTACAGCGCTATCCTGACC 133 3.2 蛭龙活血通瘀胶囊对ICH模型小鼠脑组织中炎症
下游引物：CTTCAGATGCTGTTCGCTGC 因子IL-1β和TNF-α表达的影响
Rps6kl1 上游引物：CCACTACCAGAATGGTGTGGA 109 3.2.1 免疫组化法 模型 1 组小鼠脑组织中 IL-1β和
下游引物：TGCCCTCCGTAGGTACTTGG
GAPDH 上游引物：AGGTCGGTGTGAACGGATTTG 129 TNF-α的表达水平均高于假手术 1 组，而蛭龙活血通瘀
下游引物：TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA 胶囊低、高剂量组小鼠脑组织中IL-1β和TNF-α的表达水

[17]
mRNA ；将顺式或反式 mRNA 数据导入 GO 数据网站 平均低于模型1组。结果见图2。
（http：//geneontology.org）进行功能分类并富集，应用超 3.2.2 Western blot 法 与假手术 1 组比较，模型 1 组小
几何检验找出与整个基因组背景相比显著富集的 GO 鼠脑组织中IL-1β、TNF-α蛋白的相对表达量均显著升高
条目；利用 R V4.0.4 软件“热图（heat map）包”对差异 （P＜0.05）；与模型1组比较，蛭龙活血通瘀胶囊低、高剂
LncRNA表达模式进行层级聚类分析，并使用热图呈现 量组小鼠脑组织中IL-1β、TNF-α蛋白的相对表达量均显
聚类结果。蛭龙活血通瘀胶囊干预相关有效 LncRNA 著降低（P＜0.05）。结果见图3、图4。
的筛选标准如下：在模型 2 组中找出与假手术 2 组相 3.2.3 实时定量 PCR 法 与假手术 1 组比较，模型 1 组
比有显著差异的 LncRNA，且其在干预组中的表达相对 小鼠脑组织中 IL-1β、TNF-α mRNA 的相对表达量均显
于模型组有明显改善，此LncRNA即为蛭龙活血通瘀胶 著升高（P＜0.05）；与模型 1 组比较，蛭龙活血通瘀胶囊
囊干预ICH相关的有效LncRNA。 低、高剂量组小鼠脑组织中IL-1β、TNF-α mRNA的相对
2.8 统计学方法 表达量均显著降低（P＜0.05）。结果见图5。
采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。数据以 3.3 转录组测序样本RNA质量分析
x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两 除去含数据接头（adapter）序列、含未知碱基比例大
比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。 于10％序列、全部都是A碱基序列以及低质量序列数据
3 结果 后，所得有效数据（clean data）占比均高于 99％，表明数
3.1 蛭龙活血通瘀胶囊对ICH模型小鼠脑组织形态的 据质量佳。结果见表2。
影响 3.4 差异LncRNA分析
苏木精-伊红染色结果（图 1）显示，与假手术 1 组比 假手术2组与模型2组比较，有44个差异LncRNA，
较，模型1组小鼠脑组织病理损伤严重，细胞间隙增大、 包括显著上升的LncRNA 25个、显著下降的LncRNA 19

苏木精-伊红染色

尼氏染色

A.假手术1组 B.模型1组 C.蛭龙活血通瘀胶囊低剂量组 D.蛭龙活血通瘀胶囊高剂量组
图1 蛭龙活血通瘀胶囊对ICH模型小鼠脑组织形态的影响（×100）

·1424 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 12 中国药房 2022年第33卷第12期