Page 33 - 《中国药房》2022年11期
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TG synthesis of lipid deposition model HepG2 cell，reduce the lipid accumulation of cells and prevent the lipid damage of cells. Its
        mechanism may be related to the down-regulation of the expression of ACC/FAS/DGAT2 pathway.
        KEYWORDS    total flavonoids from Matricaria recutita；lipid deposition；lipid-lowering effect


            近年来，随着社会的飞速发展和人们物质生活水平                         β-肌动蛋白（β-actin）抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊
                                                     [1]
        不断提高，高脂血症患者不断增加，发病率逐年升高 。                          抗兔 IgG 二抗（批号分别为 bsm-52486R、bsm-54469R、
        游离脂肪酸（non-esterified fatty acids，FFA）、三酰甘油         bs-12998R、bs-0061R、bs-0295G-HRP）购自北京博奥森
       （triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）中的1     生物技术有限公司；牛血清白蛋白（批号 EZ6688B182）
        种及以上升高或脂蛋白水平升高即可诊断为高脂血                             购自德国 BioFroxx 公司；10×TBST、D-101 大孔树脂（批
          [2]
        症 。该病可引发如心肌梗死、心脏猝死、糖尿病、高血                          号分别为 T1081、1021Q011）购自北京索莱宝科技有限
        压、脂肪肝等一系列疾病，是形成冠心病的主要原因之                           公司；DAPI染液、Alexa Fluor488标记的山羊抗兔IgG二
          [3]
        一 ，因此，对高脂血症的预防与治疗意义重大。洋甘菊                          抗（批号分别为 C1005、A0423）购自上海碧云天生物技
        是菊科母菊属，又称德国洋甘菊，为菊科植物洋甘菊                            术有限公司；DMEM 培养基（批号 AF29562465）购自美
        Matricaria chamomilla L.的干燥花或全草。洋甘菊具有              国HyClone公司；胎牛血清、25％胰蛋白酶（批号分别为
        降低血压、降低胆固醇、发汗通便等功效，其提取物（如                          70101002、2186974）购 自 美 国 Gibco 公 司 ；彩 色 蛋 白
        黄酮类）具有抗炎、抗氧化、抗肝毒性、抗病毒、保护血管                         Marker（40～300 kDa，批 号 26625）购 自 美 国 Thermo
        和解痉等作用      [4－5] 。本实验采用油酸和棕榈酸联合诱导                 Fisher Scientific公司；彩色蛋白Marker（10～250 kDa，批
        HepG2细胞建立脂质沉积细胞模型，探讨洋甘菊总黄酮                         号3580111）购自北京博泰斯生物技术有限公司；磷酸盐
        对肝脂质异常的调节作用及其降脂机制，以期为洋甘菊                           缓冲液（PBS，批号 26625）购自北京中杉金桥生物技术
        治疗高脂血症的临床应用提供实验依据。                                 有限公司；亚硝酸钠、氢氧化钠（批号分别为 20200803、
        1 材料                                               20210320）购自天津市盛奥化学试剂有限公司；硝酸铝
        1.1  主要仪器                                          （批号 20200305）购自天津市永晟精细化工有限公司。
            STS-2 型脱色摇床购自上海琪特分析仪器有限公                       其他试剂均为国产优质分析纯。
        司；Benchmark Plus 型全波长酶标仪、Power Pac 型垂直             1.3  主要药物
        电泳槽、Gel Doc XR+型凝胶成像分析系统、AB135-S型                       洋甘菊药材采自新疆医科大学中医学院药材基
        电子分析天平购自美国 Bio-Rad 公司；5424R 型低温高                   地，经新疆医科大学第四附属医院李永和主任中药师
        速离心机购自德国 Eppendorf 公司；SW-XJ-2F 型超净台                鉴定为母菊属一年生草本植物洋甘菊的干燥花。非诺
        购自苏州安泰空气技术有限公司；371 型直热式 CO2恒                       贝特胶囊（规格 0.2 g/粒，批号 20181239）购自美国 Ab-
        温 培 养 箱 购 自 美 国 Thermo Fisher Scientific 公 司 ；     bott 公司。
        IX71-5-12FL/pH型倒置荧光三目显微镜购自德国Roper                  1.4  细胞
        Scientific 公司；DW-HL668 型超低温冰箱购自合肥中科                    人肝癌 HepG2 细胞株购自武汉普诺赛生命科技有
        美菱低温科技股份有限公司；TCS SP8型激光共聚焦显                        限公司。
        微镜购自德国Leica公司；RE-52B型旋转蒸发仪购自上                      2 方法
        海亚荣生化仪器厂。                                          2.1  洋甘菊总黄酮的制备
        1.2 主要试剂                                           2.1.1 洋甘菊总黄酮的初步提取 取洋甘菊药材700 g，
            TG 试剂盒、FFA 试剂盒、丙氨酸转氨酶（alanine                  用 12 倍体积（8 400 mL）的 70％乙醇浸泡 2 h，放入提取
        aminotransferase，ALT）试剂盒、天冬氨酸转氨酶（aspartate         锅在80 ℃提取3次，每次2 h；合并提取液，用纱布过滤，
        aminotransferase，AST）试剂盒（批号分别为 A110-1-1、           滤液用旋转蒸发仪在 80 ℃浓缩回收乙醇，待浓缩液总
        A042-2-1、C009-2-1、C010-2-2）购自南京建成生物工程              体积为700～800 mL，冷冻干燥，收集干膏粉。
        研 究 所 ；油 红 O 溶 液 、棕 榈 酸 、油 酸（批 号 分 别 为                 检测洋甘菊总黄酮提取物中的总黄酮含量。总黄酮
        SLBW7964、SLBZ8298、0459K073）购自美国 Sigma 公            含量检测方法 ：取干膏粉0.029 70 g，置于25 mL量瓶中，
                                                                       [6]
        司；青霉素+链霉素双抗、4％多聚甲醛组织固定液（批号                         用甲醇定容至刻度，超声助溶，充分溶解；取10 mL置于
        分别为 Bj111995904、1810473）购自合肥白鲨生物科技                 25 mL量瓶中，依次加入5％亚硝酸钠溶液、10％硝酸铝溶
        有限公司；乙酰辅酶 A 羧化酶（acetyl-CoA carboxylase，            液各1 mL，每加1种试剂后，室温放置6 min；再加入4％
        ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）、二酰基           NaOH 溶液 10 mL，用甲醇定容至刻度，摇匀，在 500 nm
        甘油酰基转移酶2（diacylglycerol transferase 2，DGAT2）、      波长处检测吸光度（A）值，按回归方程 A＝0.011 30C+


        中国药房    2022年第33卷第11期                                             China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 11  ·1307 ·
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