Page 35 - 《中国药房》2022年11期

胞刮下来并转移至EP管中，以12 000 r/min 于 4 ℃离心 1.0
a
10 min；将细胞上清液转移至1.5 mL EP管中；用BCA法 0.8
检测总蛋白浓度，样品中加入4×蛋白上样缓冲液和双蒸 （ mmol/g prot ） 0.6
水，使总蛋白浓度调成一致，100 ℃煮蛋白 10 min，再置 b
于－80 ℃冰箱备用。将蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙 TG水平/ 0.4 b b b
烯酰胺凝胶电泳后转移至 PVDF 膜，取出 PVDF 膜置于 0.2
含5％脱脂奶粉的TBST封闭液中封闭1.5 h，洗涤3次后 0
对照组 模型组 非诺贝 洋甘菊总 洋甘菊总 洋甘菊总
加入一抗（ACC、FAS稀释度1 ∶ 700，DGAT2、β-actin稀释 特组 黄酮低剂 黄酮中剂 黄酮高剂
量组
量组
量组
度1 ∶ 1 000），4 ℃孵育过夜，收集一抗，洗涤3次；加入二 A.细胞中TG水平柱状图
0.10
抗（稀释度 1 ∶ 5 000），室温避光孵育 1 h，洗涤 3 次；然 a
后暗室中以 ECL 发光试剂曝光，压片、显影、定影后用 0.08
Image Lab 软 件 分 析 图 像 ，以 目 标 蛋 白 与 内 参 蛋 白 （ mmol/g prot ） 0.06 b
（β-actin）的灰度值比值表示目标蛋白的表达水平。 0.04 b b
2.7 统计学分析 FFA水平/ 0.02 b
采用 SPSS 21.0 统计软件对各组数据进行统计分
0
析，计量资料以x±s表示，多组间比较采用方差分析，组 对照组 模型组 非诺贝 洋甘菊总 洋甘菊总 洋甘菊总
特组 黄酮低剂 黄酮中剂 黄酮高剂
间两两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。 量组 量组 量组
B.细胞中FFA水平柱状图
3 结果
0.6
3.1 洋甘菊总黄酮的制备结果 a
初步提取得到的干膏粉中，总黄酮含量为 6.72％； 0.4
纯化后的干膏粉中，总黄酮含量为 56.20％。这表明分 （ mmol/L ）
离纯化后，洋甘菊总黄酮含量明显提高。 FFA水平/ 0.2 b b b b
3.2 洋甘菊总黄酮对细胞（上清液）中TG、FFA水平的
影响
0
与对照组比较，模型组细胞中的TG、FFA水平和细 对照组 模型组 非诺贝 洋甘菊总 洋甘菊总 洋甘菊总
黄酮低剂 黄酮中剂 黄酮高剂
特组
量组 量组 量组
胞上清液中的FFA水平均显著升高（P＜0.01）。与模型 C.细胞上清液中FFA水平柱状图
组比较，非诺贝特组和洋甘菊总黄酮低、中、高剂量组细 a：与对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01
胞中的 TG、FFA 水平和细胞上清液中的 FFA 水平均显 图1 各组细胞（上清液）中的TG、FFA水平检测结果
著降低（P＜0.01）。 结果见图1。 明显增强，表明DGAT2蛋白表达量明显上调；非诺贝特
3.3 洋甘菊总黄酮对HepG2细胞脂肪积累的影响 组和洋甘菊总黄酮低、中、高剂量组绿色荧光明显减弱，
由油红O染液染色结果可见，对照组细胞间结合紧 DGAT2蛋白表达量明显下调。结果见图3。
密，基本上无橘红色脂滴；模型组细胞中可见大量橘红 荧光强度检测结果显示，与对照组（23.53±1.88）比
色脂滴堆积，表明 1 mmol/L 油酸和棕榈酸混合液干预 较，模型组 DGAT2 蛋白表达荧光强度（81.40±7.21）显
24 h能显著增加细胞内脂质沉积；非诺贝特组和洋甘菊 著升高（P＜0.01）；与模型组比较，非诺贝特组和洋甘菊
总黄酮低、中、高剂量组细胞中脂滴堆积较模型组显著 总黄酮低、中、高剂量组 DGAT2 蛋白表达荧光强度
减少。结果见图2。 （35.85±2.97、44.77±1.05、35.95±1.42、35.72±1.17）显
脂质含量检测结果显示，与对照组细胞脂质 A 值 著降低（P＜0.01）。以上结果进一步验证了 DAPI 染液
（0.30±0.11）比较，模型组细胞脂质A值（0.93±0.14）显 的染色实验结果，说明洋甘菊总黄酮可以降低脂质沉积
著升高（P＜0.01）；与模型组比较，非诺贝特组和洋甘菊总 细胞中的DGAT2蛋白表达量。
黄酮低、中、高剂量组细胞脂质 A 值（0.34±0.09、0.54± 3.5 洋 甘 菊 总 黄 酮 对 HepG2 细 胞 中 ACC、FAS、
0.17、0.43±0.13、0.43±0.06）显著降低（P＜0.01）。以上 DGAT2蛋白表达水平的影响
结果进一步验证了油红O染液的染色实验结果，说明洋 Western blot 法检测结果显示，与对照组相比，模型
甘菊总黄酮可以降低脂质沉积细胞中的脂质含量。 组 ACC、FAS、DGAT2 蛋 白 表 达 水 平 显 著 升 高（P＜
3.4 洋甘菊总黄酮对 HepG2 细胞中 DGAT2 蛋白表达 0.01）；与模型组相比，非诺贝特组和洋甘菊总黄酮低、
量的影响 中、高剂量组ACC、FAS、DGAT2蛋白表达水平显著降低
由 DAPI 染液染色结果可见，模型组细胞绿色荧光 （P＜0.01）。结果见图4。

中国药房 2022年第33卷第11期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 11 ·1309 ·