Page 52 - 《中国药房》2022年9期

2.2 神经功能评分 的计量资料以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分
大鼠再灌注 24 h 后，采用 Berderson 评分法对大鼠 析，组间两两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.01。
神经功能进行评分：0分为正常，表示无神经功能缺陷；1 3 结果
分为提尾时左前肢弯曲；2分为向左侧转圈；3分为向左 3.1 猪牙皂皂苷对模型大鼠神经功能评分的影响
侧倾倒；4分为不能行走，即在无意识但疼痛刺激下会出 与正常组比较，假手术组大鼠神经功能评分差异无
现肢体活动。若评分为1～3分，则表示造模成功 。 统计学意义（P＞0.01），模型组大鼠神经功能评分显著
[11]
2.3 脑组织含水量检测 升高（P＜0.01）；与模型组比较，尼莫地平组和猪牙皂皂
大鼠再灌注 24 h 后，每组随机取 6 只大鼠，处死后， 苷高剂量组大鼠的神经功能评分均显著降低（P＜
立即取出其脑组织，精密称定脑组织湿质量，然后置于 0.01）。结果见表1。
105 ℃电热鼓风干燥箱内烘干，待干燥至恒重后再称定 表1 各组大鼠的神经功能评分和脑组织含水量测定结
脑组织质量，并按公式计算脑组织含水量：脑组织含水 果（x±±s）
量（％）＝（脑组织湿质量－脑组织干质量）/脑组织湿质
组别 神经功能评分/分（n＝12） 脑组织含水量/％（n＝6）
量×100％。 正常组 0 70.61±1.12
2.4 血清中血脂四项、炎症因子和血液流变学指标检测 假手术组 0 70.01±1.27
模型组 3.00±0.00 a 86.09±0.76 a
大鼠再灌注24 h后，各组取剩余6只大鼠，麻醉后自 尼莫地平组 0.20±0.44 b 72.74±1.46 b
眼眶取血 2 mL，4 ℃静置 30 min，以 3 000 r/min 离心 10 猪牙皂皂苷低剂量组 2.80±0.44 82.30±1.27 b
min，分离血清。根据试剂盒说明书方法测定血清中血 猪牙皂皂苷中剂量组 2.60±0.54 77.76±2.48 b
猪牙皂皂苷高剂量组 0.80±0.83 b 73.93±1.13 b
脂四项（TC、TG、LDL-C、HDL-C）和炎症因子（IL-1β、
a：与正常组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01
IL-10、TNF-α）水平。另外，于大鼠腹主动脉取血 5 mL，
3.2 猪牙皂皂苷对模型大鼠脑组织含水量的影响
4 h内用血液黏度仪进行血液流变学指标检测。
与正常组比较，假手术组大鼠脑组织含水量差异无
2.5 脑组织中氧化应激指标水平检测
统计学意义（P＞0.01），模型组大鼠脑组织含水量显著
采用 ELISA 法进行测定。取“2.4”项下取血后的大
升高（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠脑组织含
鼠，处死后，立即取出其缺血侧脑组织，一部分保存于
水量均显著降低（P＜0.01）。结果见表1。
－80 ℃冰箱中，待用；另一部分于冰浴下制成10％脑组
3.3 猪牙皂皂苷对模型大鼠血脂四项的影响
织匀浆，在 4 ℃下以 3 000 r/min 离心 10 min，取上清液，
与正常组比较，假手术组和模型组大鼠血清中TC、
根据相应试剂盒说明书方法测定缺血侧脑组织中
TG、LDL-C 水平均显著升高（P＜0.01），HDL-C 水平均
MDA、NO含量及SOD活性。
显著降低（P＜0.01）。与模型组比较，尼莫地平组、猪牙
2.6 脑组织病理形态学变化观察
皂皂苷高剂量组大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均显著
采用苏木精-伊红（HE）染色法进行观察。取“2.5”
降低（P＜0.01），HDL-C 水平均显著升高（P＜0.01）；猪
项下冷冻的脑组织适量，固定于4％多聚甲醛中，常规制
牙皂皂苷中剂量组大鼠血清中 TG、LDL-C 水平均显著
备石蜡切片（4～6 μm）并行常规HE染色，然后将切片置
降低（P＜0.01）。结果见表2。
于显微镜下观察脑组织的病理形态学变化。
2.7 脑组织中Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达检测 表2 各组大鼠血脂四项的测定结果（x±±s，n＝6，mmol/mL）
采用免疫组化法进行测定。取“2.5”项下冷冻的脑 组别 TC TG LDL-C HDL-C
正常组 9.09±1.12 6.06±0.70 16.69±2.84 3.29±0.50
组织适量，固定于 4％多聚甲醛中，经脱水、修剪、包埋、 假手术组 11.02±0.97 a 9.52±0.49 a 25.69±0.61 a 2.57±0.19 a
切片（4～6 μm）及二甲苯脱蜡、梯度乙醇脱水后，以过氧 模型组 11.50±1.54 a 9.51±0.74 a 25.33±0.47 a 2.26±0.11 a
尼莫地平组 9.25±0.98 b 7.01±0.63 b 18.40±0.22 b 3.13±0.19 b
化氢浸泡；湿盒中加入 Bax、Bcl-2、caspase-3 一抗（稀释
猪牙皂皂苷低剂量组 10.34±0.74 8.50±0.79 23.73±0.41 2.56±0.10
比例均为 1 ∶ 200），4 ℃孵育过夜；加入 HRP 标记的山羊 猪牙皂皂苷中剂量组 10.66±1.51 8.08±0.71 b 20.30±4.22 b 2.63±0.60
抗兔/小鼠 IgG 二抗（稀释比例均为 1 ∶ 200），37 ℃孵育 猪牙皂皂苷高剂量组 9.67±0.85 b 7.52±1.13 b 19.33±1.27 b 2.86±0.33 b
20 min；PBS 冲洗，二氨基联苯胺（DAB）显色，蒸馏水洗 a：与正常组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01
涤，苏木精复染，二甲苯透明，中性树胶封片。最后采用 3.4 猪牙皂皂苷对模型大鼠血液流变学的影响
显微摄像系统对切片进行图片采集，通过 Image J 1.42 与正常组比较，假手术组和模型组大鼠在各切变率
软件分析样本的平均光密度值（平均光密度值越高表示 下的全血黏度、红细胞聚集指数和卡松黏度均显著升高
蛋白表达越强）。 （P＜0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠在各切变率下
2.8 统计学方法 的全血黏度、红细胞聚集指数（除猪牙皂皂苷低剂量组
采用SPSS 19.0软件进行统计分析。符合正态分布 外）、卡松黏度均显著降低（P＜0.01）。结果见表3。

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