Page 51 - 《中国药房》2022年9期
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中风是全球致残和致死的主要原因之一，人口老龄                         ZC-36391、ZC-36379、ZC-37624），兔源 B 淋巴细胞瘤 2
                                      [1]
        化的加剧将导致中风发生率的升高 。据全球疾病负担                           （Bcl-2）抗体（美国 Santa Cruz 公司，批号 sc-492），兔源
        研究数据显示，我国总体中风发病风险为 39.9％，位居                        Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）抗体、兔源半胱氨酸蛋白酶 3
                [2]
        全球首位 。中医理论认为，中风是在内伤的基础上加                           （caspase-3）抗体（美国 CST 公司，批号分别为 2772s、
        上饮食不规律、情志不畅、过度疲劳等引起的脏腑阴阳                           9662s），辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔/小鼠免
            [3]
        失调 ；痰瘀互结是中风的主要病机和致病因素，痰浊、                          疫球蛋白G（Ig G）二抗（武汉博士德生物工程有限公司，
                                       [4]
        瘀血贯穿了中风发生发展的全过程 。因此，目前中医                           批号BST13J17B16G56），苏木精染液、伊红染液（武汉赛
        治疗中风的方法主要为祛痰和开窍。                                   维尔生物技术有限公司，批号分别为G1005-1、G1001），
            猪牙皂为豆科植物皂荚Gleditsia sinensis Lam.的干            磷酸盐缓冲液（PBS，北京索莱宝科技有限公司，pH
                                              [5]
        燥不育果实，具有祛痰开窍、消肿散结之功效 。据2020                        7.2～7.4），多聚甲醛（国药集团化学试剂有限公司）；其
        年版《中国药典》（一部）记载，以猪牙皂为主药、配以鹅                         余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为纯净水。
        不食草和细辛制成的通关散，吹鼻可治疗痰浊阻窍所致                           1.3 动物
                                         [5]
        的气闭神昏、牙关紧闭、不省人事等症 。研究表明，经                              本研究所用动物为 SPF 级 SD 雄性大鼠，共 119 只，
        鼻给药是药物到达大脑最快、最直接的途径，以该方式                           体质量为250～280 g，购自长沙市天勤生物技术有限公
        给药后药物可以无创方式通过血脑屏障 。本课题组前                           司，动物生产许可证号为 SCXK（湘）2019-0014，合格证
                                          [6]
        期研究了猪牙皂不同萃取部位经鼻给药后对缺血缺氧                            号为 430726210100322185。所有大鼠均饲养于 12 h 光
        模型小鼠血脑屏障通透性的影响，发现芳香类成分和皂                           照/12 h 黑暗、温度（25±1）℃、相对湿度（50±10）％的
                                                  [7]
        苷类成分具有较好的“通关开窍、醒脑复神”作用 。因                          动物房内，饲养期间自由摄食、饮水。实验前先适应性
        此，本研究在前期研究基础上考察猪牙皂皂苷对痰瘀互                           喂养7 d。
        结型缺血性中风（ischemic stroke with phlegm and blood      2 方法
        stasis，ISPBS）模型大鼠的保护作用和可能机制，为猪牙                    2.1  分组、造模与给药
        皂皂苷鼻内给药制剂的研制和应用提供一定的实验                                 将 119 只大鼠按照随机数字表法分成正常组（生理
        依据。                                                盐水）、假手术组（生理盐水）、模型组（生理盐水）、尼莫
        1 材料                                               地平组（阳性对照组，5 mg/kg，剂量按药品说明书中成人
        1.1  主要仪器                                          剂量换算后制定）和猪牙皂皂苷低、中、高剂量组[3.21、
            本研究所用的主要仪器有Multiskan Mk3型酶标仪                   6.42、12.84 mg/kg；剂量参考 2020 版《中国药典》（一部）
       （美国 Thermo Fisher Scientific 公司），BA200Digita 型显     猪牙皂成人每日用量（1～1.5 g），并按照体表面积法 换
                                                                                                        [8]
        微摄像系统（麦克奥迪实业集团有限公司），DZKW-4型                        算成大鼠的每日用量]，每组 17 只。正常组大鼠采用普
        恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公司），LG-R-80B                       通饲料喂养；其余各组大鼠均给予高脂饲料（由3.5％胆
        型血液黏度仪（北京中科富邦医疗设备有限公司），                            固醇、10％猪油、0.2％丙硫尿嘧啶、0.5％胆酸钠、10％白
        AUW12D型分析天平（日本Shimadzu公司）。                         糖、75.8％基础饲料组成）喂养          [4，9] 。大鼠饲养28 d后，眼
        1.2  主要药品与试剂                                       眶取血，检测血液流变学指标及血脂四项的变化，若发
            本研究所用的主要药品与试剂有：猪牙皂皂苷（本                         现各指标均异常则认为痰瘀互结型大鼠造模成功 。正
                                                                                                      [4]
        实验室按文献[7]方法自制，1 g 猪牙皂生药可以得到 57                     常组、假手术组、模型组和猪牙皂皂苷组大鼠通过鼻腔
        mg皂苷），尼莫地平片（亚宝药业集团股份有限公司，批                         给予等体积生理盐水或相应药物，尼莫地平组大鼠灌胃
        号 170606，规格 20 mg/片），三酰甘油（triacylglycerol，         给药，每天给药 1 次，连续 7 d。末次给药 1 h 后，大鼠禁
                                                                                                 [10]
        TG）试剂盒、总胆固醇（total cholesterol，TC）试剂盒、低             食不禁水 12 h，采用线栓法建立 ISPBS 模型 。具体造
        密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，      模方法为：将大鼠麻醉，然后将其仰卧固定，从颈正中切
        LDL-C）试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipo-             口 ，继 而 分 离 右 侧 颈 总 动 脉（common carotid artery，
        protein cholesterol，HDL-C）试剂盒、超氧化物歧化酶              CCA）、颈外动脉（external carotid artery，ECA）、颈内动
       （superoxide dismutase，SOD）试剂盒、丙二醛（malondial-        脉（internal carotid artery，ICA），结扎 CCA 近心端以及
        dehyde，MDA）试剂盒、一氧化氮（nitric oxide，NO）试剂             ECA，在 CCA 距离 ICA 和 ECA 分叉口 4 mm 处剪小口；
        盒（南京建成生物工程研究所，批号分别为 A110-1-1、                      将鱼线插入 ICA，缺血 2 h 后，将鱼线轻轻拔至分叉口，
        A111-1-1、A113-1-1、A112-1-1、A001-1、A003-1、A012），    再灌注24 h。正常组大鼠不进行任何处理；假手术组大
        大鼠白细胞介素1β（interleukin 1β，IL-1β）酶联免疫吸附              鼠仅分离血管，不插入鱼线及结扎，其余操作与各造模
        测定（ELISA）试剂盒、大鼠IL-10 ELISA试剂盒、大鼠肿                  大鼠相同。在ISPBS模型制备过程中，有部分组别的少
        瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA 试       数大鼠造模不成功，故本研究最终每组筛选12只大鼠进
        剂 盒（上 海 茁 彩 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为             行各指标测定。


        中国药房    2022年第33卷第9期                                              China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 9  ·1069 ·
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