Page 45 - 《中国药房》2022年9期
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and NF-κB p65 in cerebral tissue were decreased significantly（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS Dianxianqing granule can
        improve BBB injury of AD model mice by inhibiting NLRP3 inflammasome signaling pathway.
        KEYWORDS    Dianxianqing granule；Alzheimer’s disese；blood-brain barrier；NLRP3 inflammasome；tight junction proteins

            阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种常             （成都泰盟科技有限公司），Neofuge 13R型酶标仪（美国
        见的与年龄相关的神经退行性疾病 ，主要病理特征为                           BioTek 公司），ImageQuant 350 型凝胶成像系统（美国
                                       [1]
                                                     [2]
        淀粉样蛋白沉积、Tau 蛋白磷酸化以及神经元死亡等 。                        GE Healthcare 公司），DMI3000 B 型光学显微镜（德国
        近年来，越来越多的证据表明，血脑屏障（blood brain                     Leica公司）。
        barrier，BBB）功能障碍可能是导致AD 发生的病理机制                    1.2 主要药品与试剂
            [3]
        之一 。BBB由脑微血管内皮细胞、周细胞、细胞外基质                             本研究所用的主要药品与试剂有癫痫清颗粒（由辽
        和血管周围的小胶质细胞足突组成，对于维持脑稳态和                           宁中医药大学附属第二医院提供，批号20180310，每1 g
                                    [4]
        中枢神经系统微环境有重要作用 。研究发现，AD患者                          颗粒相当于生药 5.31 g），盐酸多奈哌齐片[卫材（中国）
        BBB 通透性增加，而炎症反应是促进 BBB 损伤的关键                       药业有限公司，批号 140606 A，规格 5 mg/片]，选择性
        机制之一 。                                             NLRP3炎症小体抑制剂MCC950（美国Selleck公司，批号
                [5]
            炎症小体是机体固有免疫系统的重要组成部分，主                         S780907，纯度 99.4％），β-淀粉样蛋白 25～35（β-amyloid
        要存在于小胶质细胞、巨噬细胞和树突状细胞中，其中                           25～35，Aβ 25～35，美国 Sigma 公司，批号 038M4822V），兔
        核苷酸结合域样受体蛋白 3（NLR family pyrin domain              抗咬合蛋白（occludin，ocln）多克隆抗体、兔抗闭锁小带
        containing 3，NLRP3）是较为常见的炎症小体，已被认为                 蛋白 1（zonula occluden-1，ZO-1）多克隆抗体、兔抗紧密
                                  [6]
        是潜在的 AD 炎症标志物之一 。当脑中小胶质细胞被                         连接蛋白5（claudin-5，cldn5）多克隆抗体（沈阳万类生物
        激活后，NLRP3 炎症小体的表达会增加，继而诱导炎症                        科 技 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 WL01996、WL03419、
        因子的产生，导致BBB通透性增强              [7－8] 。核转录因子κB       WL03731），兔抗 NF-κB p65 多克隆抗体、兔抗β-肌动蛋
       （nuclear factor-kappa B，NF-κB）可通过调节炎症因子的            白（β-actin）多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司，
                                               [9]
        转录，在保持 BBB 完整性中发挥着重要作用 。p53 上                      批号分别为 bs-0465R、bs-10966R），兔抗 PUMA 多克隆
        调凋亡调控因子（p53 upregulated modulator of apopto-       抗体（英国Abcam公司，批号ab9643），兔抗NLRP3多克
        sis，PUMA）是一种凋亡调控因子，其可通过增加下游                        隆抗体（美国 Proteintech 公司，批号 1977-1-1-AP），二喹
        NF-κB、NLRP3 蛋白的表达，参与脑微血管内皮细胞的                      啉甲酸（BCA）蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物技
                              [10]
        凋亡过程，诱导 BBB 损伤 。因此，阻断或抑制 NLRP3                     术有限公司，批号120219200821），辣根过氧化物酶标记
                                      [11]
        表达已成为保持BBB完整性的关键 。                                 的山羊抗兔免疫球蛋白 G（IgG）二抗（北京中杉金桥生
            癫痫清颗粒为专利药（专利号 ZL201110069494），                 物技术有限公司，批号 141987），小鼠离子钙接头蛋白 1
        由熟地黄、制何首乌、芍药（白芍）、石菖蒲、柴胡、郁金、                        （anti-ionized calcium-binding adapter molecule 1，IBA-1）
        知母等 10 味中药组成，主要含芒果苷、芍药苷和α-细辛                       酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒（上海酶联生物科技
        醚等成分    [12－14] ，具有填精益智、开窍豁痰、活血祛瘀的功                有限公司，批号 Ac02061708）；其余试剂均为分析纯，水
        效，临床主要用于神情淡漠、寡言少语、反应迟钝、善忘、                         为纯净水。
        终日不语、言辞颠倒、忽笑忽哭、不欲食及举动异常等的                          1.3  动物
        治疗。笔者前期研究发现，经癫痫清颗粒干预后，AD模                              本研究所用动物为SPF级ICR雄性小鼠，共125只，
        型小鼠的学习记忆能力和脑组织病理改变均有明显改                            体质量为 20～24 g，来源于辽宁长生生物技术有限公
        善，其具体机制与维持BBB完整性有关 。因阻断或抑                          司，实验动物生产合格证号为SCXY（辽）2020-0001。小
                                          [15]
        制 NLRP3 炎症小体对维持 BBB 完整性有重要作用，故                     鼠在沈阳医学院实验动物中心进行饲养，环境温度控制
        本课题组推测癫痫清颗粒改善 BBB 功能障碍的作用可                         在 20～23 ℃、空气相对湿度控制在 50％～60％。本实
        能与抑制 NLRP3 炎症小体信号通路活化密切相关。鉴                        验得到了沈阳医学院动物伦理委员会的批准（批准号
        于此，本研究在前期研究的基础上，采用癫痫清颗粒干                           SYYXY2020082702），实验操作符合《中华人民共和国
        预AD模型小鼠，观察其对BBB损伤的改善作用与抑制                          实验动物管理条例》要求。小鼠于实验动物中心适应性
        NLRP3炎症小体信号通路活化的关联性，旨在进一步探                         饲养7 d后进行实验。
        讨癫痫清颗粒改善AD的潜在作用机制。                                 2 方法
        1 材料                                               2.1 AD小鼠模型制备
        1.1  主要仪器                                              小鼠用戊巴比妥钠（50 mg/kg）麻醉后，将其头部固
            本研究所用的主要仪器有DW-200型脑立体定位仪                       定在脑立体定位仪上，沿正中线切开头部皮肤约 2 cm，


        中国药房    2022年第33卷第9期                                              China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 9  ·1063 ·
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