Page 37 - 《中国药房》2022年8期

2.3 含量测定 的含量。结果显示，干鱼腥草药材中新绿原酸、绿原酸、
2.3.1 色谱条件 同“2.1.1”项。 隐绿原酸、芦丁、槲皮苷含量的 RSD 分别为 1.98％、
2.3.2 混合对照品溶液的制备 同“2.1.2”项。 1.68％、1.73％、2.67％、0.20％（n＝6），干鱼腥草饮片中
2.3.3 供试品溶液的制备 同“2.1.3”项。 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、槲皮苷含量的 RSD
2.3.4 空白溶液的制备 不加样品，按“2.3.3”项下“精 分别为 1.72％、1.56％、1.93％、2.41％、0.31％（n＝6），表
密加入70％乙醇30 mL……即得”操作，即得空白溶液。 明方法重复性良好。
2.3.5 系统适用性试验 取上述混合对照品溶液、供试 2.3.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的干鱼腥
品溶液、空白溶液适量，按“2.3.1”项下色谱条件进样测 草药材（编号 YC1）样品粉末 0.5 g，共 9 份，分别加入混
定，记录色谱图（图3）。由图3可知，各成分分离度均大 合对照品溶液（精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、
于1.5，理论板数均不低于3 000，空白溶液对各成分的测 芦丁、槲皮苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释，制成各成
定无干扰。 分质量浓度分别为 490.256、278.568、364.648、293.760、
2.3.6 线性关系考察 取“2.3.2”项下混合对照品溶液 3 065.904 μg/mL的混合对照品溶液）0.5、1.0、1.5 mL，按
适量，用甲醇稀释，制成新绿原酸质量浓度分别为3.77、 “2.3.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3.1”项下色谱
7.54、15.07、30.14、60.29 μ g/mL，绿 原 酸 分 别 为 1.40、 条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见
2.80、5.60、11.21、22.42 μg/mL，隐绿原酸分别为 3.76、 表4。精密称取已知含量的干鱼腥草饮片（编号YP1）样
7.53、15.06、30.11、60.22 μg/mL，芦丁分别为 2.19、4.38、 品粉末0.5 g，共9份，分别加入混合对照品溶液（精密称
8.77、17.53、35.06 μg/mL，槲皮苷分别为 25.49、50.99、 取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、槲皮苷对照品适
101.97、203.94、407.88 μ g/mL 的 系 列 工 作 溶 液 ，按 量，加甲醇溶解并稀释，制成各成分质量浓度分别为
“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以各待测 122.564、46.428、76.768、78.336、1 249.072 μg/mL的混合
成分质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线 对照品溶液）0.5、1.0、1.5 mL，按“2.3.3”项下方法制备供
性回归，结果见表3。 试品溶液，再按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰
表3 新绿原酸等5种成分的回归方程与线性范围 面积并计算加样回收率，结果见表5。
待测成分 回归方程 r 线性范围/（μg/mL） 2.3.11 样品含量测定 取10批干鱼腥草药材及饮片样
新绿原酸 Y＝26 594X+10 629 0.999 7 3.77～60.29 品粉末，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，再按
绿原酸 Y＝31 825X－7 299 0.999 5 1.40～22.42 “2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准曲
隐绿原酸 Y＝19 693X+3 796 0.999 9 3.76～60.22
芦丁 Y＝9 936X+585 0.999 9 2.19～35.06 线法计算样品含量。每样品平行测定 3 次，结果见表
槲皮苷 Y＝14 104X+41 059 0.999 7 25.49～407.88 6。由表6可知，将干鱼腥草药材炮制为饮片后，新绿原
2.3.7 精密度试验 取“2.3.6”项下某系列工作溶液（新 酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、槲皮苷的平均含量均不同
绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、槲皮苷质量浓度分别 程度地降低，其中芦丁的降幅最大，约为62.3％。
为 15.07、5.60、15.06、8.77、101.97 μ g/mL）适 量 ，按 3 讨论
“2.3.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面积。 本课题组前期分别对供试品溶液的提取溶剂、提取
结果显示，新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、槲皮苷峰 方式、料液比和加热回流时间进行了考察，结果显示，当
面 积 的 RSD 分 别 为 0.55％ 、1.01％ 、1.11％ 、0.94％ 、 以70％乙醇为提取溶剂、料液比为1 ∶ 30（g/mL）、加热回
0.13％（n＝6），表明仪器精密度良好。 流时间为 30 min 时，提取效率最高，所得色谱图的基线
2.3.8 稳定性试验 取“2.3.3”项下干鱼腥草药材（编号 较平稳、各色谱峰分离度较好且杂质干扰较小。综合考
YC1）、干鱼腥草饮片（编号YP1）供试品溶液适量，分别 虑，最终确定供试品溶液的制备方法如下：取样品粉末
于室温下放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.3.1”项下色谱条 约 1.0 g，加入 70％乙醇 30 mL，加热回流 30 min。本课
件进样测定，记录峰面积。结果显示，干鱼腥草药材中 题组前期采用二极管阵列检测器在190～800 nm波长范
新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、槲皮苷峰面积的 围内进行扫描，结果显示，待测样品在320 nm波长下所
RSD 分别为 1.06％、1.28％、1.69％、1.86％、0.09％（n＝ 得色谱信息较全面，色谱峰峰形整体良好，故选择检测
6），干鱼腥草饮片中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、芦丁、 波长为320 nm。此外，本课题组前期还考察了乙腈-水、
槲皮苷峰面积的 RSD 分别为 1.14％、1.33％、1.75％、 乙腈-0.05％磷酸溶液、乙腈-0.05％乙酸溶液3个流动相
2.30％、0.12％（n＝6），表明上述供试品溶液于室温下放 体系的分离效果，结果显示，当以乙腈-0.05％乙酸溶液
置24 h内稳定性良好。 为流动相时，各色谱峰分离效果较好且杂质干扰较小。
2.3.9 重复性试验 取干鱼腥草药材（编号YC1）、干鱼 目前，关于鱼腥草的研究大多为鱼腥草药材，且仅
腥草饮片（编号YP1）样品粉末，各6份，按“2.3.3”项下方 限于指纹图谱研究 [14－16] 或含量测定 [17－21] ，而两者结合的
法制备供试品溶液，再按“2.3.1”项下色谱条件进样测 研究较少。虽然，张婷婷等 、卢红梅等 将定性与定量
[23]
[22]
定，记录峰面积并按标准曲线法计算样品中各待测成分 分析相结合，但只研究了其中 1～3 种黄酮类成分，较为

中国药房 2022年第33卷第8期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 8 ·927 ·