Page 35 - 《中国药房》2022年8期

min，8％A；26～31 min，8％A→14％A；31～61 min， 按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。将上述
14％A→24％A，61～86 min，24％A→39％A；86～104 色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012
min，39％A→74％A；104～108 min，74％A→95％A）；流 版）》，以任意样品的色谱图为参照图谱，采用中位数法，
速为 1.0 mL/min；检测波长为 320 nm；柱温为 25 ℃；进 设置时间窗宽度为 0.1 min，进行多点校正和色谱峰匹
样量为10 μL。 配，经全峰匹配后得到干鱼腥草药材及饮片的叠加指纹
2.1.2 混合对照品溶液的制备 精密称取新绿原酸、绿 图谱和对照指纹图谱（R）。结果显示，10批干鱼腥草药
原酸、隐绿原酸、芦丁、槲皮苷对照品适量，加甲醇溶解 材及饮片均有20个共有峰，详见图1、图2。
并稀释，制成上述 5 种成分质量浓度分别为 120.576、 11
320
44.832、120.448、70.128、815.760 μg/mL 的混合对照品 300
280
溶液。 260
240 8
2.1.3 供试品溶液的制备 取样品粉末（过三号筛，下 220
200 1
同）约 1.0 g，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入 70％ U/mV 180 2 3 4 5 6 7 9 10 12 13 14 15 16 17 18 19 20 R
160
乙醇30 mL，称定质量，加热回流30 min，放冷，再次称定 140 YC10
YC9
120
100 YC8
质量，用 70％乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤 80 YC7
YC6
60 YC5
液，经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。 40 YC4
YC3
20 YC2
2.1.4 精密度试验 取干鱼腥草药材（编号YC1）、干鱼 0 YC1
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
腥草饮片（编号YP1）样品粉末，按“2.1.3”项下方法制备 t/min
供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱条件连续进样测定 6 图1 10批干鱼腥草药材的HPLC叠加指纹图谱和对照
次，记录色谱图。以槲皮苷为参照，计算各共有峰的相 指纹图谱
对保留时间和相对峰面积。结果显示，干鱼腥草药材中
200 11
各共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.22％～0.97％（n＝
180
6），相对峰面积的 RSD 为 0.98％～1.64％（n＝6）；干鱼 160
腥草饮片中各共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.23％～ 140 8
120 1 5 9 14 18 19
1.14％（n＝6）、相对峰面积的 RSD 为 1.09％～1.84％ U/mV 100 2 3 4 6 7 10 12 13 15 16 17 20 R
（n＝6），表明方法精密度良好。 80 YP10
YP9
YP8
2.1.5 稳定性试验 取干鱼腥草药材（编号YC1）、干鱼 60 YP7
YP6
40 YP5
腥草饮片（编号YP1）样品粉末，按“2.1.3”项下方法制备 YP4
20 YP3
供试品溶液，分别于室温下放置 0、2、4、8、12、24 h 时按 0 YP2
YP1
“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以槲皮苷 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
t/min
为参照，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。
图2 10批干鱼腥草饮片的HPLC叠加指纹图谱和对照
结果显示，干鱼腥草药材中各共有峰相对保留时间的
指纹图谱
RSD 为 0.39％～1.21％（n＝6），相对峰面积的 RSD 为
1.62％～2.39％（n＝6）；干鱼腥草饮片中各共有峰相对 2.1.8 共有峰的指认 取“2.1.2”项下混合对照品溶液，
保留时间的 RSD 为 0.56％～1.20％（n＝6），相对峰面积 按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。将所得
的 RSD 为 1.78％～2.54％（n＝6），表明供试品溶液于室 色谱图（图3A）与“2.1.7”项下干鱼腥草药材及饮片的色
温下放置24 h内稳定性良好。 谱图进行比对，共指认了5个共有峰，分别为新绿原酸（1
2.1.6 重复性试验 取干鱼腥草药材（编号YC1）、干鱼 号峰）、绿原酸（3号峰）、隐绿原酸（4号峰）、芦丁（7号峰）、
腥草饮片（编号YP1）样品粉末，各6份，按“2.1.3”项下方 槲皮苷（11号峰）。因槲皮苷的峰面积较大且周围基线平
法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱条件进样测 稳，干扰峰较少，故选择槲皮苷为参照。此外，与干鱼腥草
定，记录色谱图。以槲皮苷为参照，计算各共有峰的相 药材相比，其饮片样品色谱中的5号峰和14号峰的峰面
对保留时间和相对峰面积。结果显示，干鱼腥草药材中 积均显著增加，可用于区分干鱼腥草药材和饮片。
各共有峰相对保留时间的 RSD 为 1.07％～1.82％（n＝ 2.1.9 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似度评
6），相对峰面积的 RSD 为 1.01％～2.10％（n＝6）；干鱼 价系统（2012版）》对干鱼腥草药材及饮片指纹图谱的相
腥草饮片中各共有峰相对保留时间的 RSD 为 0.99％～ 似度进行评价。结果显示，与对照指纹图谱比较，干鱼
1.83％（n＝6），相对峰面积的 RSD 为 1.02％～2.23％ 腥草药材及饮片指纹图谱的相似度均大于 0.960，表明
（n＝6），表明方法重复性良好。 各样品化学成分的种类一致性良好，详见表2。
2.1.7 指纹图谱的建立 分别取 10 批干鱼腥草药材及 2.2 化学计量学分析
饮片样品粉末，按“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再 2.2.1 PCA 为探讨干鱼腥草药材及饮片的成分差异，

中国药房 2022年第33卷第8期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 8 ·925 ·