Page 53 - 《中国药房》2022年7期
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检验水准α＝0.05。结果显示，FRL 的平均粒径和 Zeta                    之间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用
        电位分别为（172.70±3.76）nm和（－1.16±0.15）mV，RL             Turkey 检验，检验水准α＝0.05。结果，FCL 组细胞的绿
        的平均粒径和 Zeta 电位分别为（169.10±4.15）nm 和                 色荧光强度（134.89±17.61）显著高于 CL 组（22.30±
       （－1.42±0.18）mV，2种叶酸脂质体间粒径和Zeta电位                    10.62）和空白对照组（15.34±4.39）（P＜0.01），表明细胞
        差异均无统计学意义（P＞0.05）。                                 对 FCL 的摄取量显著高于 CL。该结果提示，所制叶酸
        2.3.2  包封率    参考文献[17－18]方法并加以调整后进                 靶向阴离子脂质体可以有效地将药物递送到 HepG2 细
        行测定。取5 nmoL anti-miR-221溶于250 µL水中，配成              胞内。
        20 µmol/L的水溶液，作为母液。取母液分别制备成1.0、
        0.8、0.5、0.4、0.25 µmol/L 5个浓度的水溶液，利用全波长
        扫描式多功能读数仪在激发波长 493 nm、发射波长 518
        nm条件下检测其荧光强度。以anti-miR-221浓度（x）为
        横坐标、荧光强度（y）为纵坐标作图（图 1），并拟合得到
        线性回归方程 y＝168 676x－2 472.1（R ＝0.999 6）。结
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        果显示，anti-miR-221在上述检测浓度范围内，与其荧光
        强度呈现出良好的线性关系。
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               200 000

               150 000
              荧光强度  100 000


                50 000
                  0
                    0       0.5       1       1.5
                              浓度/（μmol/L）
                                                                                            20 μm
                  图1 anti-miR-221的标准曲线
                                                              A：空白对照组；B：CL组；C：FCL组
            分别取 FRL、RL，加入适量 10％ Triton X-100，超声            图 2   钙黄绿素脂质体在 HepG2 细胞中摄取情况的荧
       （功率480 W、频率40 kHz）振荡2 min破膜，根据前文绘                         光显微图
        制的标准曲线，测定并计算 FRL、RL 中 anti-miR-221 含               2.6  细胞凋亡检测
        量，并计算其包封率：包封率（％）＝脂质体中 anti-miR-                        采用 Annexin Ⅴ/PI 双染色法检测细胞凋亡情况。
        221 含量/总投料量×100％。按照“2.3.1”项下方法进行
                                                           将对数生长期的HepG2细胞按每孔8×10 个接种于6孔
                                                                                               5
        统计分析。结果显示，FRL、RL 中 anti-miR-221 的包封
                                                           板中，将细胞置于培养箱中常规培养过夜。分别设置
        率分别为（83.53±1.85）％、（85.23±2.43）％，两组间差               空白对照组、RL组、FRL组。空白对照组给予培养基常
        异无统计学意义（P＞0.05）。                                   规培养，加药组按 anti-miR-221 每孔 200 nmol/L 的浓度
        2.4  细胞培养
                                                           加入 RL、FRL，在 37 ℃下培养 24 h 后，将细胞常规消
            将 HepG2 细胞接种至含有 1％青霉素-链霉素和
        10％胎牛血清的无叶酸RPMI 1640培养基中，将培养基                      化并转移至 EP 管中，以 PBS 洗涤细胞 3 遍后，按 YF               ®
                                                           488- Annexin Ⅴ/PI试剂盒方法操作，采用流式细胞仪分
        置于 37 ℃、5％CO2细胞培养箱中培养。本研究所用的
                                                           析 HepG2 细胞的凋亡情况（图 3）。按“2.5”项下方法进
        为传代5～10代的细胞。
        2.5 细胞摄取实验                                         行统计分析。结果，与空白对照组[（13.34±1.46）％]比
                                                           较 ，RL 组 和 FRL 组 细 胞 的 凋 亡 率 [ 分 别 为（19.09 ±
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            将处于对数生长期的HepG2细胞按每孔5×10 个接
        种于6孔板中，将细胞置于37 ℃、5％CO2细胞培养箱中                       3.28）％、（33.08±2.90）％]均显著升高（P＜0.05 或 P＜
        培养过夜。分别设置空白对照组、CL 组、FCL 组，每组                       0.01），且 FRL 组细胞的凋亡率显著高于 RL 组（P＜
        设置3个复孔。空白对照组给予培养基常规培养，加药                           0.01）。
        组分别按钙黄绿素（模型药物）每孔 14 μg/mL 的质量浓                     2.7 细胞周期检测
                                                                                                      5
        度加入 CL、FCL，在 37 ℃培养 1 h，然后将细胞转移至                       将处于对数生长期的HepG2细胞按每孔8×10 个接
        1.5 mL EP 管中，以 PBS 清洗 3 遍后，置于激光共聚焦扫                种于6孔板中，置于培养箱中常规培养过夜。分别设置
        描显微镜下观察（图 2）。经 Image J 1.52a 软件分析，得                空白对照组、RL组、FRL组，每组设置3个复孔。空白对
        各组 HepG2 细胞的荧光强度。采用 GraphPad Prism 5               照组给予培养基常规培养，加药组按 anti-miR-221 每孔
        软件对实验数据进行统计分析，数据以 x±s 表示；多组                        200 nmol/L的浓度加入RL、FRL，培养24 h后，将细胞进


        中国药房    2022年第33卷第7期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 7  ·815 ·
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