Page 44 - 《中国药房》2022年7期

表3 羊栖菜提取物对脂多糖刺激下BV2细胞活性的影 组和不同质量浓度羊栖菜提取物组细胞上清液中
响结果（x±±s，n＝3，％％） TNF-α、IL-6 含量均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。结
组别 细胞存活率 组别 细胞存活率 果见表4。
空白对照组 100±0.09 羊栖菜提取物40 μg/mL组 98.85±0.05 c 表 4 各组细胞上清液中 TNF-α、IL-6 的含量测定结果
模型组 124.09±0.01 a 羊栖菜提取物60 μg/mL组 97.63±0.02 b （x±±s，n＝3，ng/mL）
阳性药物组 91.05±0.14 b 羊栖菜提取物80 μg/mL组 97.49±0.05 b
羊栖菜提取物20 μg/mL组 120.87±0.15 羊栖菜提取物100 μg/mL组 101.93±0.05 b 组别 TNF-α IL-6
空白对照组 957.56±63.45 87.81±0.36
a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模
模型组 1 248.67±14.14 a 147.62±3.02 a
型组比较，P＜0.05
阳性药物组 795.33±54.02 b 83.92±0.53 b
3.4 细胞形态观察结果 羊栖菜提取物40 μg/mL组 978.67±56.67 b 84.92±5.64 b
空白对照组细胞大多较圆润，胞体直径较小，未见 羊栖菜提取物60 μg/mL组 1 020.89±22.19 c 96.36±1.51 b
形态较长的细胞突触生长。模型组活化细胞的数量显 羊栖菜提取物80 μg/mL组 1 049.78±40.57 c 91.71±1.95 b
著增加，且胞体变肥大，细胞突触变长。阳性药物组和 a：与空白对照组比较，P＜0.01；b：与模型组比较，P＜0.01；c：与模
型组比较，P＜0.05
不同质量浓度羊栖菜提取物组细胞的胞体大多较圆润，
与模型组比较，各给药组细胞的突触增长情况得到缓 4 讨论
物质基础研究是药物开发和活性研究的关键环节。
和、活化细胞数量减少。结果见图3。
为了更加全面地提取、分析羊栖菜的化学成分，本课题
组前期分别比较了不同极性溶剂（80％甲醇、乙酸乙酯、
乙醇、水）、不同超声提取时间（10、30、60、90 min）对样品
中非挥发性成分提取效果的影响。结果表明，当溶剂为
80％甲醇、提取时间为 60 min 时，提取物中可以检测到
的化合物数量最多、各成分的相对含量更高。为使实验
操作简便、高效，本研究选择以80％甲醇为提取溶剂，采
空白对照组 模型组
用超声提取 60 min 的方式制备 UHPLC-QTOF-MS/MS
分析的样品。此外，本课题组前期还比较了不同极性溶
剂（三氯甲烷、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇）、不同
提取方式（索氏提取法、水蒸气蒸馏法）和不同提取时间
（4、6、8 h）对样品中挥发性成分提取效果的影响。结果
发现，当使用索氏提取法以石油醚为溶剂提取4 h时，能
检测并鉴定出50种化合物；当使用水蒸气蒸馏法提取8 h
阳性药物组 羊栖菜提取物20 μg/mL组
时，能检测并鉴定出60种化合物。为了更加全面地分析
羊栖菜成分，本研究选择了以水蒸气蒸馏法提取 8 h 的
方式制备GC-MS/MS分析的样品。
本研究首次使用 UHPLC-QTOF-MS/MS 结合 GC-
MS/MS 进行了羊栖菜的全成分分析。通过 UHPLC-
QTOF-MS/MS分析共鉴定出103种非挥发性成分，通过
GC-MS/MS分析共鉴定出60种挥发性成分，完善了羊栖
羊栖菜提取物40 μg/mL组 羊栖菜提取物60 μg/mL组
菜的全成分研究。有研究表明，7-羟基香豆素、补骨脂
素、蛇床子素等香豆素类小分子化合物对于神经系统有
保护作用 [31－34] 。尤其是蛇床子素，其对于阿尔茨海默病
患者的神经损伤具有一定保护作用 。海藻羊栖菜所
[35]
含成分中包含以上多种小分子香豆素类化合物，故本课
题组推测，羊栖菜具有潜在的抗神经炎症作用。
IL-6 可调节免疫应答和多种细胞的生长、分化，临
羊栖菜提取物80 μg/mL组 羊栖菜提取物100 μg/mL组
床常通过监测 IL-6 含量来评估炎症反应的严重程
图3 细胞形态显微图（×100）
度 [36] 。TNF-α是一种重要的炎症因子，在细胞增殖、分
3.5 细胞上清液中TNF-α、IL-6含量测定结果 化和凋亡中扮演重要角色 。本研究建立体外脂多糖
[37]
与空白对照组比较，模型组细胞上清液中 TNF-α、 诱导BV2细胞炎症模型，选取可调节经典炎症通路——
IL-6含量显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，阳性药物 丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，

·806 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 7 中国药房 2022年第33卷第7期