Page 39 - 《中国药房》2022年7期
P. 39

羊栖菜Sargassum fusiforme（Harv.）Setch.是褐藻门        DST210311-187，纯度≥98％）均购自成都埃法生物科技
        马尾藻科马尾藻属植物的干燥藻体，习称“小叶海藻”，                          有限公司；蛇床子素对照品（批号 201601114，纯度≥
        主要分布于辽宁、山东、福建、浙江、广东等沿海地带的                          98％）、帕罗西汀对照品（批号2019021134，纯度≥98％）
                [1]
        温暖水域 ，是我国一种较为常见且资源丰富的海藻。                           均购自成都瑞芬思生物科技有限公司；磷酸盐缓冲液
        据2020年版《中国药典》（一部）记载，羊栖菜的形状特点                       （PBS，批号 20210506）、高糖 DMEM 培养基均购自美国
        为分枝互生、无刺状突起、藻体较小、叶条形或细匙                            CellMax 公司；胎牛血清购自美国 Gibco 公司；胰酶购自
          [2]
        形 。羊栖菜早在《神农本草经》中就有记载，具有软坚                          美国 Solarbio 公司；青霉素-链霉素（批号 191118164）购
                           [3]
        散结、消痰利水之功效 。相关研究显示，羊栖菜所含成                          自苏州新赛美生物科技有限公司；CCK-8 试剂（批号
                                             [5]
                    [4]
        分具有降血糖 、减轻动脉粥样硬化的作用 ，是一种极                          GK100011）购自美国GlpBio公司；脂多糖购自美国Sigma
        具研究前景的药食两用植物。                                      公 司 ；小 鼠 肿 瘤 坏 死 因 子 α（tumor necrosis factor α ，
            我国的海洋资源十分丰富，海洋药物展现出了良好                         TNF-α）、白细胞介素 6（interleukin- 6，IL-6）酶联免疫吸
        的开发前景     [6－9] 。但相比于传统中药，海洋药物的总体                  附检测（ELISA）试剂盒（批号分别为202107、202106）均
        研究开发以及质量控制水平仍需加强，《中国药典》对包                          购自江苏酶免实业有限公司；甲醇、乙醇、甲酸、乙腈为
        括羊栖菜在内的海洋药物主要是采用硫酸-蒽酮显色法                           色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为去离子水。
        控制其多糖含量，相关研究也多集中在羊栖菜多糖的制                           1.3 细胞株
        备、分离、结构确定及活性评价等方面               [10－11] ，尚缺乏对羊         小鼠小胶质细胞BV2购自中国科学院上海细胞库。
        栖菜相关功效涉及的潜在活性化合物（如黄酮类、香豆                           2 方法
        素类、生物碱类化学成分）的研究             [12－13] ，忽视了羊栖菜所       2.1 羊栖菜化学成分分析
        富含的小分子活性成分及其具备的潜在活性。                               2.1.1 UHPLC-QTOF-MS/MS 分析供试品溶液的制备
            目前，已有报道采用化学分离的方法对羊栖菜乙酸                           称取1 g羊栖菜药材粉末，加入10 mL 80％甲醇，超声
                                            [14]
        乙酯、石油醚等萃取部位的成分进行分析 ，但对羊栖                           （功率 280 W，频率 40 kHz）提取 60 min，过滤，取续滤液
        菜所含成分的全面分析研究尚为空白。鉴于此，本研究                           置于10 mL量瓶中，以80％甲醇定容，即得。进样前，使
        采 用 超 高 效 液 相 飞 行 时 间 质 谱 联 用 技 术（UHPLC-           用0.22 μm滤头过滤。
        QTOF-MS/MS）和气相色谱-质谱联用技术（GC-MS/                     2.1.2 GC-MS 分析供试品溶液的制备              取剪碎的药材
        MS）获得海藻羊栖菜的全谱分析数据库，完善对海藻羊                          500 g，置于 10 000 mL 圆底烧瓶中，加 10 倍量（5 000
        栖菜多糖以外的小分子化合物的研究，并开展以细胞模                           mL）水，使用挥发油提取器提取8 h，收集所得挥发油，用
        型为基础的羊栖菜体外抗神经炎症活性实验，为其今后                           精油小瓶封存。进样时，取200 μL挥发油置于10 mL量
        功效活性成分的研究、质量控制方法的优化以及后续活                           瓶中，加无水乙醇定容，然后使用0.45 μm微孔滤膜过滤。
        性化合物的开发提供参考。                                       2.2  色谱与质谱条件
        1 材料                                               2.2.1 UHPLC-QTOF-MS/MS 分析条件          色谱条件如
        1.1  主要仪器                                          下：使用 Acquity UPLC BEH C18 色谱柱（100 mm×2.1
            本研究所用的主要仪器有 AB SCIEX Triple TOF                mm，1.7 μm），以水（含0.1％甲酸，A相）-乙腈（含0.1％甲
        5600+型高分辨飞行时间质谱联用仪（美国Sciex公司），                     酸，B 相）为流动相进行梯度洗脱（0～15 mim，5％B→
        LC-30A 型超高效液相色谱仪（日本 Shimadzu 公司），                  55％B；15～45 min，55％B→95％B；45～47 min，95％ B；
        Agilent 7890A/5975C 型 GC-MS/MS 仪（美国 Agilent 公      47～47.10 min，95％B→5％B）；柱温为 40 ℃；流速为
        司），MS105DU 型电子天平（瑞士 Mettler Toledo 公司），            0.3 mL/min，进样量为 3 μL。质谱条件如下：使用正、负
        KQ-500B型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司），                       离子2种扫描模式，扫描范围为m/z 50～1 550；电压设置
        DZTW型调温电热套（北京市永光明医疗仪器有限公司），                        正、负值均为4 500 V，去簇电压为100 V；电喷雾离子源
        64R 型恒温高速离心机（美国 Beckman Coulter 公司），               （ESI）温度为500 ℃；气帘气压力为40 psi，雾化气、辅助
        Varioskan LUX 型酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific     气压力均为50 psi；碰撞能量为（40±10）eV。
        公司），TS100型倒置显微镜（日本Nikon公司）。                        2.2.2 GC-MS分析条件        色谱条件如下：使用HP-5MS
        1.2 主要药品与试剂                                        色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；采用程序升温（初始温
            海藻羊栖菜干燥药材（批号 19061309）购自安国市                    度为 60 ℃、保持 2 min，以 2 ℃/min 升温至 80 ℃、保持 2
        一方药业有限公司，经江西中医药大学岐黄国医书院吴                           min，以10 ℃/min升温至120 ℃、保持5 min，以10 ℃/min
        蜀瑶中药师鉴定为真品；7-羟基香豆素对照品（批号                           升温至160 ℃、保持5 min，以5 ℃/min升温至280 ℃、保
        DSTDQ006601，纯度≥98％）、川陈皮素对照品（批号                     持10 min）；载气为氦气，载气流速为1.2 mL/min；进样量
        DST00690120，纯度≥98％）、滨蒿内酯对照品（批号                     为2 μL，进样口温度为260 ℃，分流比为20 ∶ 1；传输管线
        AF21052105，纯度≥98％）、异贝壳杉烯酸对照品（批号                    温度为280 ℃。质谱条件如下：电子轰击离子源（EI）温


        中国药房    2022年第33卷第7期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 7  ·801 ·
   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44