Page 81 - 《中国药房》2022年5期
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分，具有抗氧化、降血脂、抗血栓及抗心肌缺血等作                            用 50％甲醇定容，摇匀，制得盐酸益母草碱、阿魏酸、芦
        用 。近年来的研究主要集中于益母草颗粒中盐酸水苏                           丁、金丝桃苷质量浓度依次为55、10、100、20 µg/mL的混
          [7]
        碱和盐酸益母草碱的含量测定，未见其他指标成分的含                           合对照品溶液。
        量测定和指纹图谱研究          [8－10] ，难以科学、全面地对该药的           2.3 供试品溶液的制备
        质量进行控制。而指纹图谱及多指标成分检测能够提                                取益母草颗粒4.0 g，精密称定，置于150 mL具塞锥
        供丰富的化学成分信息，全面呈现药材及其制剂的质量                           形瓶中，精密加入50％甲醇25 mL，密封，称定质量后超
        优劣，从而保证其内在品质的稳定性和均一性                    [11－12] 。鉴  声（功率 600 W，频率 40 kHz）处理 40 min，冷却至室温，
        于此，本研究采用高效液相色谱（HPLC）法建立 10 批益                      再次称定质量，用 50％甲醇补足减失的质量，摇匀，用
        母草颗粒的指纹图谱，并结合聚类分析和主成分分析                            0.45 μm微孔滤膜滤过，收集续滤液，即得。
       （principal component analysis，PCA）2种化学模式识别分         2.4 指纹图谱的建立及分析
        析方法，同时通过建立HPLC法测定其中盐酸益母草碱、                         2.4.1  精密度试验      取益母草颗粒（S6）适量，按“2.3”项
        芦丁、金丝桃苷和阿魏酸4个指标成分的含量，旨在为全                          下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件连续进
        面评价和控制益母草颗粒的质量提供参考依据。                              样测定6次，记录色谱图，以盐酸益母草碱为参照峰（S）
        1 材料                                               计算各共有峰的相对峰面积和相对保留时间。结果，各
                                                           共有峰相对峰面积和相对保留时间的 RSD 均小于
        1.1 主要仪器
                                                           1.00％（n＝6），表明该仪器的精密度良好。
            Ultimate 3000 型 HPLC 仪（配备四元泵、自动进样
                                                           2.4.2  稳定性试验      取益母草颗粒（S6）适量，按“2.3”项
        器、柱温箱、二极管阵列检测器和Chromeleon 7色谱工作
                                                           下方法制备供试品溶液，在室温（10～30 ℃）下分别放置
        站）购买于美国Thermo Fisher Scientific公司；MS205DU
                                                           0、2、4、8、12、18、24 h，再按“2.1”项下色谱条件进样测
        型电子天平购买于梅特勒-托利多仪器（上海）有限公
                                                           定，记录色谱图，以盐酸益母草碱为参照峰（S）计算各共
        司；HH-S114型恒温水浴锅购买于金坛市华龙实验仪器
                                                           有峰的相对峰面积和相对保留时间。结果，各共有峰相
        厂；SD25-12DT型超声清洗机购买于宁波新芝生物科技
                                                           对峰面积和相对保留时间的RSD均小于2.00％（n＝7），
        股份有限公司。
                                                           表明供试品溶液在室温下放置24 h稳定性良好。
        1.2  药品与试剂
                                                           2.4.3  重复性试验       取益母草颗粒（S6）适量，共称取 6
            10批益母草颗粒（记为S1～S10，批号分别为180201、
                                                           份，分别按“2.3”项下方法平行制备 6 份供试品溶液，再
        180202、180401、180601、180602、180603、180604、190301、
                                                           按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，以盐酸益
        190302、190303，规格为每袋 15 g）均由吉林天力泰药业
                                                           母草碱为参照峰（S）计算各共有峰的相对峰面积和相对
        有限公司提供；盐酸益母草碱（批号 111823-201704，纯
                                                           保留时间。结果，各共有峰相对峰面积和相对保留时间
        度94.3％）、阿魏酸（批号110773-201614，纯度99％）、芦
                                                           的 RSD 均小于 2.00％（n＝6），表明该方法的重复性
        丁（批号 100080-201409，纯度 91.9％）、金丝桃苷（批号
                                                           良好。
        111521-201507，纯度 94.3％）对照品均购买于中国食品
                                                           2.4.4  指纹图谱的建立及共有峰的指认                取 10 批益母
        药品检定研究院；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分
                                                           草颗粒各适量，分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液。
        析纯，水为超纯水。                                          取上述供试品溶液和“2.2”项下混合对照品溶液，按
        2 方法与结果                                           “2.1”项下色谱条件分别进样测定，记录色谱图。将 10
        2.1 色谱条件                                           批益母草颗粒的色谱图导入《中药指纹图谱相似度评价
            采用 Inertsil TM  ODS-3 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5      系统（2012 版）》中，以样品 S6 的色谱图为参照图谱，设
        μm），以乙腈（A）-0.1％甲酸溶液（B）为流动相进行梯度                     置时间窗宽度为 0.10 min，以全谱峰形式进行自动匹配
        洗脱（0～20 min，5％A→15％A；20～40 min，15％A→               生成叠加指纹图谱，并采用中位数法生成对照指纹图谱
        20％A；40～65 min，20％A），流速为1.0 mL/min，柱温为             R。通过与混合对照品溶液图谱比对，对共有峰进行指
        25 ℃，检测波长为280 nm，进样量为5 μL。                         认。结果显示，10批益母草颗粒的色谱图中共匹配出16
        2.2 混合对照品溶液的制备                                     个共有峰。通过与混合对照品溶液图谱比对，指认出其
            称取盐酸益母草碱、阿魏酸、芦丁、金丝桃苷对照品                        中 4 个共有峰，依次为盐酸益母草碱（6 号峰）、阿魏酸
        各适量，用 50％甲醇溶解并稀释制成质量浓度依次为                          （13号峰）、芦丁（14号峰）、金丝桃苷（16号峰）。10批益
        276、164、236、272 µg/mL的单一对照品溶液。精密量取                 母草颗粒的HPLC叠加指纹图谱和对照指纹图谱R见图
        上述单一对照品溶液各适量，置于同一 10 mL 量瓶中，                       1，混合对照品溶液的HPLC图见图2。


        中国药房    2022年第33卷第5期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5  ·587 ·
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