Page 27 - 《中国药房》2022年5期

69.9（C-1），51.6（C-2），75.6（C-3），72.8（C-4），32.8（C-5）， 计算OH·清除率：OH·清除率（％）＝1－[（样品管A－空
30.5（C-6），30.8（C-7），30.8（C-8），30.8（C-9），30.5 白对照管 A）/对照管 A]×100％。采用 GraphPad Prism 5
（C-10），30.6（C-11），73.0（C-12），30.7（C-13），30.3 软件计算各化合物对以上 3 种自由基的半数清除浓度
（C-14），30.7（C-15），33.1（C-16），23.7（C-17），14.4 （IC50 ），结果见表1。
（C-18），104.7（CGlu-1），75.0（CGlu-2），77.9（CGlu-3），71.6 表1 各化合物对3种自由基的IC50测定结果（μg/mL）
（CGlu-4），78.0（CGlu-5），62.6（CGlu-6），177.1（C-1″），35.7 样品 DPPH· ABST + OH·
（C-2″），26.1（C-3″），30.8（C-4″），30.8（C-5″），30.8 维生素C 20.26 17.63 15.32
化合物11 47.37 50.65 48.52
（C-6″），30.8（C-7″），27.2（C-8″），131.4（C-9″），131.6
化合物22 120.45 127.83 118.21
（C-10″），26.1（C-11″），30.7（C-12″），30.7（C-13″），33.1 化合物33 125.32 131.56 123.18
（C-14″），23.7（C-15″），14.4（C-16″）。以上数据与文 化合物44 86.13 89.41 83.57
化合物55 69.36 67.24 63.58
献[15]报道的基本一致，故鉴定化合物 9 为 bonaroside，
化合物66 40.13 43.72 41.45
其结构见图1。 化合物77 58.62 55.36 52.51
2.3 化合物1～9的抗氧化活性初步评价 化合物88 60.17 56.85 54.17
化合物99 77.32 81.76 79.78
2.3.1 溶液的制备 （1）样品溶液：分别精密称取受试
由表 1 可知，小花青风藤 70％乙醇提取物中分离、
化合物5.0 mg，以无水乙醇溶解并定容至5 mL量瓶中，
鉴定出的9个单体化合物对DPPH·、ABST 和OH·均表
+
得到各受试化合物质量浓度均为 1.0 mg/mL 的贮备液；
现出一定的清除能力。其中，化合物2、3的抗氧化活性
取上述贮备液，分别用无水乙醇稀释，制备成各化合物
较弱，对 3 种自由基的 IC50均大于 100 μg/mL；化合物 1、
质量浓度分别为 160、80、40、20、10、5 μg/mL 的样品溶
6、7、8的抗氧化活性相对较强，对3种自由基的IC50均小
液，备用。（2）阳性对照品溶液：精密称取维生素 C 粉末
25 mg，用无水乙醇制备成质量浓度为 1 mg/mL 的阳性 于70 μg/mL。
对照品贮备液；取上述贮备液，用无水乙醇稀释并制成 3 讨论
质量浓度分别为 0.5、0.25、0.1、0.05、0.025、0.01 mg/mL 从中药次生代谢产物中探寻天然抗氧化活性成分
[19]
的阳性对照品溶液，备用。 已成为人工合成新的抗氧化试剂的重要途径 。目前，
2.3.2 抗氧化活性评价 （1）DPPH 自由基（DPPH·）清 已从小花清风藤中分离、鉴定出的化学成分有生物碱
除能力测定：参考文献[16]方法并加以改进后进行测 类、黄酮类及萜类等。其中，生物碱成分种类较多，包括
定。在试管中依次加入0.2 mL样品溶液（或阳性对照品 吡咯类生物碱、苄基四氢异喹啉类生物碱、苯酞类四氢
溶液）和 0.2 mmol/L 的 DPPH 工作液（以无水乙醇制备） 异喹啉类生物碱、阿朴菲碱类生物碱、普罗托品类生物
4 mL，常温避光反应30 min，作为样品管；对照管以水代 碱及其他类生物碱，这些成分多具有抗肿瘤、抗病毒及
替样品溶液，同法操作。以 0.2 mL 水与 4 mL 无水乙醇 抗炎等生物活性 [20－21] 。最新研究报道了小花清风藤药
混合作为空白对照进行调零，在517 nm波长下测定各溶 材的指纹图谱与其抗氧化活性的谱效关系，证实了小花
液的吸光度（A），并计算 DPPH·清除率：DPPH·清除率 清风藤中含有丰富的黄酮类成分，且具有自由基清除活
[22]
（％）＝（1－样品管 A/对照管 A）×100％。（2）ABTS 自由 性 。为进一步确定小花清风藤中抗氧化活性成分，本
+
基（ABTS ）清除能力测定：参考文献[17]方法并加以改 研究系统地提取、分离了小花清风藤中化学成分，并进
进后进行测定。在试管中依次加入0.1 mL样品溶液（或 行了体外抗氧化活性研究。
+
阳性对照品溶液）和 6 mL ABTS 工作液，常温避光反应 从黄酮类、酚类及挥发油等次生代谢产物中筛选出
10 min，作为样品管；对照管以水代替样品溶液，同法操 较强的抗氧化活性成分，从而获得天然抗氧化试剂已成
作。以0.1 mL水与6 mL无水乙醇混合作为空白对照进 为研究热点 [23－25] 。本研究从小花清风藤的 70％乙醇提
行调零，在 734 nm 波长处测定各溶液的 A，并计算 取物中分离、鉴定出 9 个化合物，包括 4 个黄酮类化合
ABTS 清除率：ABTS 清除率（％）＝（1－样品管 A/对照 物、1个萜类化合物、1个酚类化合物、1个酰胺类化合物
+
+
管A）×100％。（3）OH自由基（OH·）清除能力测定：参考 和2个苯甲酸酯类化合物。根据已有研究，本研究所得
文献[18]方法并加以改进后进行测定。在试管中依次加 到的黄酮类化合物具有抑菌、清除自由基、抑制血管平
入 9 mmol/L 硫酸亚铁 0.5 mL、9 mmol/L 水杨酸 0.5 mL、 滑肌细胞增殖和迁移等活性 [26－28] ，萜类化合物具有免疫
[29]
样品溶液（或阳性对照品溶液）2 mL、水 4 mL 以及 8.8 抑制活性 ，酰胺类化合物具有黄嘌呤氧化酶抑制活
[15]
mmol/L 过氧化氢溶液 0.5 mL，摇匀，在 37 ℃水浴加热 性 。体外抗氧化实验结果显示，化合物1～9均具有一
15 min 后取出，作为样品管；对照管以水代替过氧化氢 定的体外抗氧化活性。其中，黄酮类化合物1、6、7、8的
溶液，同法操作；空白对照管以2 mL无水乙醇替代样品 体外抗氧化活性优于其他几个化合物，对 DPPH·、
溶液，同法操作。在 510 nm 波长下测定各溶液的 A，并 ABTS 和 OH·的 IC50均小于 70 μg/mL；特别是化合物 6，
+

中国药房 2022年第33卷第5期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5 ·533 ·