Page 25 - 《中国药房》2022年5期
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花清风藤70％乙醇提取物的化学成分开展深入研究，并                          水]纯化得到组分Fr.16-A～Fr.16-H，其中组分Fr.16-C经
        对从中分离、鉴定出的化合物进行体外抗氧化活性评                            制备型 HPLC 仪（55％甲醇-水）纯化得到化合物 1（21.2
        价，以期为进一步深入开展小花清风藤化学成分及药理                           mg）、化合物6（11.8 mg）和化合物7（12.6 mg）。
        活性研究，以及扩大其药用活性部位提供科学依据。                            2.2 小花清风藤化学成分的结构鉴定
        1 材料                                               2.2.1  化合物1     化合物1的分子式为C27H30O16，为黄色
        1.1 主要仪器                                           无定形粉末；盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阳性；
                                                                                            +
            本研究所用的主要仪器包括 Bruker-400 型超导核                   电 喷 雾 - 质 谱（ESI-MS）m/z [M + H] 611.1；H-NMR
                                                                                                    1
        磁共振（NMR）光谱仪（德国 Bruker 公司）、V-5000 型可                （DMSO-d6，400 MHz）δ H：12.59（1H，brs，5-OH），7.55
        见分光光度计（上海元析仪器有限公司）、LC-16P制备型                       （2H，overlapped，H-2′，H-6′），6.84（1H，d，J＝8.3 Hz，
        高效液相色谱（HPLC）仪（日本 Shimadzu 公司）、AAPI                 H-5′），6.38（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.18（1H，d，J＝2.0
        3200 型质谱（MS）仪（美国 Sciex 公司）、Agilent-1260 型          Hz，H-6），5.33（1H，d，J＝7.4 Hz，HGlu-1），4.38（1H，d，J＝
                                                                                                   13
        HPLC 仪（美国 Agilent 公司）、N-1300 型旋转蒸发仪（上              1.0 Hz，HRha-1），0.98（3H，d，J＝6.1 Hz，HRha-6）。 C-NMR
        海爱朗仪器有限公司）、FA2104N型电子天平（上海菁海                       （DMSO-d6，100 MHz）δ C：156.4（C-2），133.2（C-3），177.3
        仪器有限公司）。                                           （C-4），161.2（C-5），98.7（C-6），164.2（C-7），93.6（C-8），
        1.2 主要药品与试剂                                        156.5（C-9），103.9（C-10），121.1（C-1′），115.2（C-2′），
            小花清风藤于2018年8月采自云南省富宁县，由贵                       144.7（C-3′），148.4（C-4′），116.2（C-5′），121.5（C-6′），
        州中医药大学生药实验室孙庆文教授鉴定为清风藤科                            101.2（CGlu-1），74.0（CGlu-2），76.4（CGlu-3），70.5（CGlu-4），
        清风藤属小花清风藤 S. parviflora Wall. ex Roxb.的叶           75.9（CGlu-5），66.9（CGlu-6），100.7（CRha-1），70.3（CRha-2），
        片。维生素 C 购自东北制药集团沈阳第一制药有限公                          69.9（CRha-3），71.8（CRha-4），68.2（CRha-5），17.7（CRha-6）。以
        司（批号5210421，规格100 mg）；2，2-联苯基-1-苦基肼基               上数据与文献[7]报道的基本一致，故鉴定化合物1为芦
       （DPPH）购自上海麦克林生化科技有限公司；2，2′-联氮                       丁，其结构见图1。
        基双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）、葡聚
        糖凝胶LH-20均购自北京索莱宝科技有限公司；柱层析
        硅 胶 购 自 青 岛 海 洋 化 工 厂 分 厂 ；C18 反 相 柱 填 料
                                                                                               化合物2
        ODS-A-HG购自日本YMC公司；甲醇为色谱纯，其余试                               化合物1
        剂均为分析纯，水为去离子水。
        2 方法与结果
        2.1  小花清风藤化学成分的提取分离                                                       化合物4        化合物5
                                                                   化合物3
            取干燥的小花清风藤 16.3 kg，粉碎，以 70％乙醇
       （130.4 L/次）加热回流提取3次、每次2 h。回收乙醇，将
        所得乙醇提取物加水分散后，依次采用石油醚、乙酸乙
        酯、水饱和正丁醇进行萃取，回收溶剂后，分别得到石油
        醚萃取部位（100.2 g）、乙酸乙酯萃取部位（220.42 g）和                          化合物6                     化合物7
        正丁醇萃取部位（530.68 g）。取正丁醇萃取部位（280 g）
        进行硅胶柱（200～300 目）色谱分离，以二氯甲烷-甲醇
       （30 ∶ 1、20 ∶ 1、10 ∶ 1、8 ∶ 1、6 ∶ 1、4 ∶ 1、2 ∶ 1、1 ∶ 1，V/V）进行梯
                                                                                                  化合物9
        度洗脱，结合薄层色谱分析及合并相同组分后，得到
        Fr.1～Fr.35 共 35 个组分，并对 Fr.3、Fr.8、Fr.15、Fr.16 这 4            化合物8
                                                                     图1 化合物11～99的结构示意图
        个组分进行进一步分离纯化。其中，组分Fr.3进一步用
        Sephadex-LH20柱色谱纯化得到化合物2（16.1 mg）和化                2.2.2  化合物 2    化合物 2 的分子式为 C26H42O4，为淡黄
                                                                                       +
                                                                                                1
        合物 3（13.3 mg）；组分 Fr.8 进一步用 ODS 反相柱色                色油状物；ESI-MS m/z [M+H] 419.3。 H-NMR（400
        谱[甲醇（20％～100％）-水]纯化得到化合物4（15.2 mg）                 MHz，C5D5N）δ H：0.89（9H，m），1.26（13H，m），1.69（2H，
        和化合物 5（14.5 mg）；组分 Fr.15 进一步用 ODS 反相柱              dd，J＝12.2、6.1 Hz），4.11（2H，m），7.52（1H，dd，J＝5.7、
                                                                                               13
        色谱[甲醇（20％～100％）-水]纯化得到组分 Fr.15-A～                  3.3 Hz），7.91（1H，dd，J＝5.7、3.3 Hz）。 C-NMR（100
        Fr.15-G，其中 Fr.15-E 经制备型 HPLC 仪（58％甲醇-水）            MHz，C5D5N）δ C：11.1（C-17，C-26），14.3（C-16，C-25），
        纯化得到化合物 8（13.6 mg）和化合物 9（12.4 mg）；组分               23.1（C-11，C-20），24.1（C-13，C-22），29.3（C-15，C-24），
        Fr.16 进一步用 ODS 反相柱色谱[甲醇（20％～100％）-                 30.1（C-12，C-21），32.1（C-10，C-19），39.1（C-14，C-23），


        中国药房    2022年第33卷第5期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5  ·531 ·
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