Page 74 - 《中国药房》2022年3期
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OPLS-DA 载荷图中的点离原点越远，表明对应变                       水、甲醇-0.1％磷酸溶液、甲醇-0.1％甲酸溶液等流动相
        量权重值越大 。OPLS-DA载荷图见图10，可知对第1                        进行考察。综合实验经济性、色谱图基线平稳水平和基
                     [21]
        主成分影响较大的有峰2（没食子酸）、峰24（鞣花酸）、峰                        线分离程度，最终确定甲醇-0.1％甲酸溶液为流动相，并
        23（诃子林鞣酸）、峰29、峰27，对第2主成分影响较大的                       对洗脱梯度条件进行优化。依次考察了 25、30、35、
        有峰1（诃子次酸）、峰8（安石榴苷B）、峰9、峰6（安石榴                       40 ℃柱温，结果表明柱温变化对色谱峰的峰形、保留时
        苷A）、峰3（石榴皮鞣素）、峰11（jasminoside B）、峰4、峰               间影响较小，根据本课题组前期实验基础 ，最终选择
                                                                                                 [23]
        18、峰14（柯里拉京）。提取的29个变量中，变量投影重                        柱温为30 ℃。
        要性（variable importance in the projection，VIP）值大于        采用全波长扫描，通过色谱峰数目和响应值大小进
        1，说明该变量对整体模型的贡献度高于平均水平，可作                           行筛选，分析发现，在254 nm波长条件下，三子散HPLC
                                      [22]
        为筛选具有显著贡献变量的标准 。OPLS-DA VIP 值                       指纹图谱基线较平稳，共有峰数量较多且具有较高的响
        图见图 11，可知 VIP 值＞1 且误差线不超过原点的变量                      应值，故选择254 nm为HPLC指纹图谱的检测波长。
        有 14 个，排列顺序为峰 1（诃子次酸）＞峰 2（没食子                       3.3 指纹图谱研究
        酸）＞峰 8（安石榴苷 B）＞峰 9＞峰 6（安石榴苷 A）＞峰                        中药材成分复杂，受不同生长环境、生长期、采收期
        24（鞣花酸）＞峰 3（石榴皮鞣素）＞峰 11（jasminoside                 以及加工、炮制方法等多方面的影响，其内在质量会有
        B）＞峰4＞峰18＞峰23（诃子林鞣酸）＞峰29＞峰14（柯                      很大差异。本实验在生成对照指纹图谱时采用中位数
        里拉京）＞峰 27。两种方法的结果结合，可作为判定标                          法，可弥补用平均数法易受个别超常样本影响的缺点，
        准筛选差异性标志物。                                          使生成的对照图谱更具代表性 。
                                                                                      [24]
                                                                本实验在前期实验基础及刘昌孝院士等 提出的
                                                                                                    [25]
             0.2
             0.1 0                                         “中药质量标志物”概念基础上，从化学成分特有性、传
           0.813 368*pq[2]  －0.1                            统功效和化学成分可测性等方面对三子散质量标志物
                                                            进行预测分析，选择与中药质量特性密切相关的标志
           －0.2
           －0.3
           －0.4                                             物，建立三子散HPLC指纹图谱，确定29个共有峰，并指
                                                            认出其中的诃子次酸、没食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷
           －0.5
             －0.3   －0.2  －0.1    0     0.1   0.2           A、安石榴苷B、jasminoside B、咖啡酸、柯里拉京、京尼平
                              0.920 724*pq[1]
            p1～p29：共有峰1～29                                  苷、诃子鞣酸、1，2，3，4，6-O-没食子酰葡萄糖、诃子林鞣
               图10    29个共有峰的OPLS-DA载荷图                     酸、鞣花酸 13 个化学成分。15 批三子散各共有峰相对
                                                            保留时间的 RSD 为 0.021％～0.680％，表明其化学组成
           2.5                                              一致性较好；各共有峰相对峰面积的RSD为15.793％～
            2
           1.5                                              70.853％，提示15批三子散的某些共有化学成分含量有
            1                                               所差异。各批次样品图谱与对照图谱的相似度结果均
         VIP值  0.5 0                                        不低于0.952，表明各批次三子散化学组成一致性较好。
          －0.5                                                  经与各缺味阴性对照、单味药饮片HPLC图比对，诃
           －1                                               子、栀子的色谱峰得到较充分表征，但川楝子并未贡献
          －1.5
                                                            色谱峰。这是由于三子散为各单味药饮片等比配比的
           －2
               p1  p2  p8  p9  p6  p24  p3  p11  p4  p15  p18  p23  p29  p5  p14  p27  p17  p20  p10  p7  p13  p19  p16  p25  p21  p28  p22  p26  p12  复方制剂，在现有实验条件下，相比于诃子、栀子，川楝
            p1～p29：共有峰1～29                                  子主要成分为柠檬苦素型三萜类化合物，多为弱紫外吸
              图11    29个共有峰的OPLS-DA VIP值图                   收或无紫外吸收，响应低、干扰大，很难达到理想的基线
                                                                [26]
        3 讨论                                                分离 。当前实验条件下，本研究对于三子散的质量控
        3.1 提取条件的考察                                         制仍存在不足，本课题组后期将在此研究基础上兼顾质
            在供试品溶液制备过程中，分别考察了超声、加热                          量标志物，通过液质联用或其他多种检测器串联的测定
        回流 2 种提取方法，甲醇、70％甲醇、50％甲醇、30％甲                      方法建立相对全面的三子散指纹图谱或其他质控方法，
        醇、水5种不同提取溶剂，15、30、45 min 3种不同提取时                    不断完善三子散质量控制研究。
        间对三子散有效成分提取的影响。综合色谱峰数量、响                            3.4 化学模式识别
        应值和实验经济性等因素考虑，确定采用甲醇为提取溶                                CA与PCA结果一致，均可将15批三子散聚为4类，
        剂、超声提取30 min作为供试品溶液的处理方法。                           即 S7 样品单独聚为一类，S3～S5、S9、S13 样品聚为一
        3.2  色谱条件的优化                                        类，S1、S2、S6、S8、S10～S12 样品聚为一类，S14、S15 样
            在指纹图谱方法研究过程中，分别对甲醇-水、乙腈-                        品 聚 为 一 类 ，表 明 15 批 三 子 散 的 质 量 存 在 差 异 。


        ·324 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 3                                    中国药房    2022年第33卷第3期
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