Page 71 - 《中国药房》2022年3期

液，摇匀，即得。 经多点校正后Mark峰匹配生成15批三子散的HPLC叠
2.2.2 供试品溶液 称取各单味药饮片适量，分别粉碎 加指纹图谱和对照指纹图谱（R），共标定了 29 个共有
成粗粉，过 40 目筛。按 2020 年版《中国药典》（一部）中 峰，详见图1、图2。
规定的三子散验方比例（等比），精密称取各单味药饮片 5 600
5 200
粉末10.0 g，混匀，即得三子散样品。精密称取上述三子 4 800
散样品1.0 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL， 4 400
4 000
称定质量，超声（40 kHz，500 W）提取 30 min，放至室温 3 600
3 200
后再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，4 ℃条 信号/mV 2 800
件避光保存；进样前经0.22 μm针式过滤器过滤，取续滤 2 400
2 000
1 600
液，即得。 1 200
800
2.2.3 缺味阴性对照溶液 按2020年版《中国药典》（一 400
部）中规定的三子散验方比例，以1.2 g为处方总量，分别 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
配制不含川楝子或栀子或诃子的缺味阴性样品处方，并 时间/min
按“2.2.2”项下方法处理，即得各缺味阴性对照溶液。 图1 15批三子散的HPLC叠加指纹图谱（S1～S15）
2.2.4 单味药饮片溶液 按 2020 年版《中国药典》（一
部）中规定的三子散验方比例，以1.2 g为处方总量，计算 480
440
各单味药饮片的质量，分别按“2.2.2”项下方法处理，即 400
360
得各单味药饮片溶液。 320
2.3 方法学考察 信号/mV 280
240
2.3.1 精 密 度 试 验 取 三 子 散（S14）样 品 适 量 ，按 200
160
“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件 120
80
连续进样6次，记录色谱图。以京尼平苷色谱峰（其色谱 40
峰较稳定、分离度良好且保留时间、峰面积适中）为参照 0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
峰（S），计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。 时间/min
结 果 显 示 ，各 共 有 峰 相 对 保 留 时 间 的 RSD 均 小 于 图2 三子散的对照指纹图谱（R）
2.00％，相对峰面积的 RSD 均小于 3.00％，表明所用仪
2.4.2 共有峰的指认 按“2.1”项下色谱条件，分别对混
器精密度良好。
合对照品溶液和三子散（S1）供试品溶液进样分析。通
2.3.2 重 复 性 试 验 取 三 子 散（S14）样 品 适 量 ，按
过将混合对照品溶液和三子散（S1）供试品溶液 HPLC
“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下 图进行比对，指认出 13 个共有峰，分别为：峰 1（诃子次
色谱条件进样测定。以京尼平苷色谱峰为参照峰（S）， 酸）、峰 2（没食子酸）、峰 3（石榴皮鞣素）、峰 6（安石榴
计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显 苷 A）、峰8（安石榴苷B）、峰11（jasminoside B）、峰13（咖
示，各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 2.00％，相对 啡酸）、峰 14（柯里拉京）、峰 16（京尼平苷）、峰 20（诃子
峰面积的RSD均小于3.00％，表明本方法重复性良好。 鞣酸）、峰 22（1，2，3，4，6-O-没食子酰葡萄糖）、峰 23（诃
2.3.3 稳 定 性 试 验 取 三 子 散（S14）样 品 适 量 ，按 子林鞣酸）、峰 24（鞣花酸），详见图 3。以峰 16（京尼平
“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于室温下放置0、 苷）为参照峰（S），计算各共有峰的相对保留时间和相对
3、6、9、12、24、48 h 时按“2.1”项下色谱条件进样测定。 峰面积，详见表2、表3。
以京尼平苷色谱峰为参照峰（S），计算各共有峰的相对 2.4.3 共有峰的归属 分别按“2.2.2”“2.2.3”“2.2.4”项
保留时间和相对峰面积。结果显示，各共有峰相对保留 下方法制备三子散全方溶液、缺味阴性对照溶液和单味
时间的 RSD 均小于 2.00％，相对峰面积的 RSD 均小于 药饮片溶液，并按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色
3.00％，表明供试品溶液于室温下放置 48 h 内稳定性 谱图，详见图 4。将三子散全方、缺味阴性对照、单味药
良好。 饮片的 HPLC 图进行比较，对 29 个共有峰进行药材归
2.4 指纹图谱的建立及相似度评价 属。其中，峰 1～峰 9、峰 11、峰 12、峰 14、峰 15、峰 17～
2.4.1 指纹图谱的建立 按“2.2.2”项下方法，分别制备 峰 24、峰 26、峰 28、峰 29 为诃子专属峰，峰 10、峰 13、峰
S1～S15三子散样品的供试品溶液，按“2.1”项下色谱条 16、峰 25、峰 27 为栀子专属峰；川楝子主要成分紫外吸
件进样测定，记录色谱图。采用《中药色谱指纹图谱相 收较弱，在当前检测条件下响应较低，未贡献峰。
似度评价系统（2012版）》处理色谱图，设定S1样品色谱 2.4.4 指纹图谱相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱
图为参照图谱，设置时间窗宽度0.1 min，采用中位数法， 相似度评价系统（2012版）》对15批三子散的HPLC指纹

中国药房 2022年第33卷第3期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 3 ·321 ·