Page 101 - 《中国药房》2022年2期

药股份有限公司；肝素钠注射液（国药准字H32020612， 200 μL，加入“2.1.2”项下内标工作溶液 800 μL，涡旋混
批号51809105，规格2 mL∶12 500单位）购自江苏万邦生 匀，以14 000 r/min离心8 min，取上清液进样分析。
化医药股份有限公司；小牛血清蛋白（bovine serum albu- 2.2.2 胎盘灌流液样品 取“2.1.3”项下胎盘灌流液样
min，BSA）干粉（批号 0306C272）购自美国 VWR Life 品 180 μL，加入甲醇 20 μL，混匀，加入“2.1.2”项下内标
Science公司；甲酸、乙腈、甲醇均为色谱纯，水为超纯水。 工作溶液800 μL，涡旋混匀，以14 000 r/min离心8 min，
2 方法与结果 取上清液进样分析。
2.1 溶液的制备 2.3 色谱与质谱条件
2.1.1 混合对照品贮备液 精密称取盐酸氟西汀对照 2.3.1 色谱条件 以 Synergi TM Hydro-RP 80A LC（50
品 2.79 mg、盐酸去甲氟西汀对照品 2.80 mg、盐酸舍曲 mm×2 mm，4 μm）为色谱柱，以水（含 0.1％甲酸，A）-乙

林 对 照 品 2.79 mg，用 甲 醇 溶 解 并 定 容 ，制 得 FXT、 腈（含 0.1％甲酸，B）为流动相进行梯度洗脱（0～1.00
NFXT、SERT质量浓度均为50.0 μg/mL的混合对照品贮 min，2％ B；1.00～2.00 min，2％ B→90％ B；2.00～3.00
备液，于－30 ℃下保存，备用。 min，90％B；3.00～3.10 min，90％B→2％B；3.10～4.00
2.1.2 标准曲线工作溶液、质控工作溶液和内标工作溶 min，2％B）；流速为 0.70 mL/min；柱温为 40 ℃；进样量
液 取“2.1.1”项下混合对照品贮备液，用甲醇逐级稀 为5 μL。
释，制成 FXT、NFXT、SERT 质量浓度均分别为 5 000、 2.3.2 质谱条件 离子源为 ESI，检测模式为正离子模
2 500、1 250、500、250、125、50.0 ng/mL的系列标准曲线 式，以多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）
工作溶液。另取“2.1.1”项下混合对照品贮备液，用甲醇 模式进行扫描；离子源电压为 5 000 V；离子化温度为
稀释，制得FXT、NFXT、SERT质量浓度均分别为4 500、 600 ℃；雾化气（gas1，N2 ）压力为 414 kPa；辅助气（gas2，
2 500、150 ng/mL 的系列质控工作溶液。精密称取内标 N2 ）压力为345 kPa；碰撞气压力为83 kPa；气帘气压力为
对照品 150 mg，用乙腈溶解并定容，制得质量浓度为 83 kPa；采用 Analyst Software 1.5.2 软件对数据进行分
3.00 mg/mL 的内标贮备液，于－30 ℃下保存；使用时， 析。FXT、NFXT、SERT 及内标的质谱参数见表 1，其质
取上述内标贮备液 80.0 μL，加入乙腈 300 mL 稀释，混 谱图见图1。
匀，制得质量浓度为800 ng/mL的内标工作溶液。 表1 FXT、NFXT、SERT及内标的质谱参数
2.1.3 空白胎盘灌流液和含药胎盘灌流液 取 Krebs- 待测成分 母离子m/z 子离子m/z 碰撞能量/eV 去簇电压/V
Ringe缓冲液500 mL，加入5％碳酸氢钠注射液4 mL、肝 FXT 309.9 148.1 17 21
NFXT 296.0 134.4 21 17
素钠注射液2 mL、注射用青霉素钠0.48 g，混匀后，加入 SERT 306.1 159.0 36 34
BSA 15.0 g，充分搅拌，溶解。将该溶液均分为 2 份，其 内标 493.9 369.1 56 34
中 1 份加入低分子右旋糖酐 7.5 g，充分搅拌均匀，得子 2.4 方法学考察
体侧胎盘灌流液（含低分子右旋糖酐约30 g/L，即空白胎 2.4.1 专属性考察 分别取“2.1”项下空白胎盘灌流液、
盘灌流液）。另 1 份加入低分子右旋糖酐 2.1 g，充分搅 标准曲线样品溶液、含药胎盘灌流液，按“2.2”项下方法
拌均匀，得母体侧胎盘灌流液（含低分子右旋糖酐约8.4 处理（空白胎盘灌流液勿需添加内标）后，再按“2.3”项下
g/L）。 色谱与质谱条件进样分析，记录色谱图。结果显示，胎
2.1.4 标准曲线样品溶液 取“2.1.3”项下空白胎盘灌 盘灌流液中的缓冲液、低分子右旋糖酐等物质对各药物
流液 180 μL，加入“2.1.2”项下系列标准曲线工作溶液 的测定无干扰，表明该方法专属性良好。结果见图2。
20 μL，制得 FXT、NFXT、SERT 质量浓度均分别为 500、 2.4.2 线性关系考察 取“2.1.4”项下标准曲线样品溶
250、125、50.0、25.0、12.5、5.00 ng/mL 的标准曲线样品 液，按“2.2”项下方法处理后，再按“2.3”项下色谱与质谱
溶液。 条件进样分析，记录峰面积。以待测成分的质量浓度
2.1.5 质控样品溶液 取“2.1.3”项下空白胎盘灌流液 （x，ng/mL）为横坐标、待测成分与内标峰面积的比值（y）
180 μL，加入“2.1.2”项下系列质控工作溶液20 μL，制得 为纵坐标进行线性回归（权重为 1/x）。结果显示，FXT
FXT、NFXT、SERT 质量浓度均分别为 450、250、15.0 的 回 归 方 程 为 y＝0.003 88x + 0.001 15（r＝0.991 2），
ng/mL的质控样品溶液。 NFXT 为 y＝0.003 86x+0.002 52（r＝0.993 9），SERT 为
2.2 样品处理 y＝0.005 59x+0.031 4（r＝0.994 8），FXT、NFXT、SERT
2.2.1 标准曲线样品溶液及质控样品溶液 取“2.1.4” 检测质量浓度的线性范围均为5.00～500 ng/mL，定量下
项下标准曲线样品溶液及“2.1.5”项下质控样品溶液各 限均为5.00 ng/mL。

中国药房 2022年第33卷第2期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 2 ·219 ·