Page 30 - 《中国药房》2021年23期
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（1-7）were increased significantly in AngⅡ+ siRNA+Que40 group（P＜0.05）；compared with AngⅡ+A779 group，the protein
        expression of Ang-（1-7）were increased significantly in AngⅡ+A779+ Que40 group（P＜0.05）. Compared with AngⅡ group，the
        protein expression of NCX was decreased in AngⅡ+Que40 group（P＜0.05），protein expression of NCX was reduced in AngⅡ+
        losartan group（P＜0.05）；compared with AngⅡ+A779 group，the protein expression of NCX was decreased in AngⅡ+A779+
        Que80 group （P＜0.05）. CONCLUSIONS：Que improves the expression of Ang Ⅱ -induced ACE2-Ang-（1-7）-Mas axis in
        cardiomyocyte model to some extent，so as to regulate myocardial contractile protein.
        KEYWORDS     Quercetin；ACE2-Ang-（1-7）-Mas axis；Cardiomyocytes；Angiotensin Ⅱ；Myocardial contractile protein

            心力衰竭是多种心脏疾病的终末期阶段，其主要的                          仪（美国 Molecular Devices 公司），ROC-3000TVBB 型
        病理特征是心肌收缩力下降和心功能降低 。肾素-血                            CO2培养箱（美国Revco公司），LDZ5-2型低速自动平衡
                                              [1]
        管紧张素（RAS）系统是广泛存在于心血管循环的体液                           离心机（北京雷勃尔医疗器械有限公司），DMI3006型倒
        调节系统，其过度激活是导致心力衰竭进展的关键环                             置荧光显微镜（德国Leica公司），CK40型倒置相差显微
        节。血管紧张素转换酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1                           镜（日本Olympus公司），Alpha 1106分光光度计（上海谱
        型受体轴（ACE-AngⅡ-AT1R 轴）是 RAS 系统的重要组                   元仪器有限公司），164-5050 电泳仪、Mini-Protean 垂直
        成部分；其中 AngⅡ是关键因子，可引起心肌收缩力下                          电泳槽、Mini Trans-Blot 转印电泳仪（美国 Bio-Rad 公
                                   [2]
        降等多种心血管系统不良反应 。近年来有研究发现，                            司），Biofuge Stratos 型台式高速冷冻离心机（美国 Ther-
        RAS 系统中的血管紧张素转换酶 2-血管紧张素-（1-7）-                     mo Fisher Scientific 公 司），FC-96G 聚 合 酶 链 式反应
        Mas 轴[ACE2-Ang-（1-7）-Mas 轴]可拮抗 ACE-AngⅡ -          （PCR）仪（杭州比格飞序生物科技有限公司），ABI 7500
        AT1R 轴；其中 ACE2 是关键因子，它可有效地将 AngⅡ                    Fast型荧光定量PCR仪（美国Applied Biosystems公司）。
        降解为 Ang-（1-7），后者与其特异性受体 Mas 结合从而                    1.2  主要药品与试剂
        抑制ACE-AngⅡ-AT1R轴造成的不良反应，增加心肌收                           本研究使用的主要药品包括：Que（上海麦克林生化
            [3]
        缩力 。                                                科技有限公司，批号 Q817161），A779（南京肽业生物科
                                                   2+
            心肌收缩力与Ca 循环有着密切联系，Na /Ca 交换                     技有限公司，批号NJP90025-181225），氯沙坦对照品（美
                                                +
                           2+
        通道（NCX）、钙泵（SERCA2a）、磷蛋白（PLB）是心肌细                    国 Sigma-Aldrich 公司，批号 124750-99-8），AngⅡ（美国
        胞中调节心肌收缩力的主要蛋白：NCX能够交换细胞内                           Sigma 公司，批号 4474-91-3）。本研究使用的主要试剂
        外的Na 和Ca 从而维持细胞内的Ca 稳态 ；SERCA2a                     包括：胎牛血清（以色列Bioland公司，批号04-001-1A），
               +
                                             [4]
                    2+
                                        2+
        是介导心肌细胞Ca 重新进入肌浆网的关键蛋白，可将                           DMEM 培养基、胶原酶Ⅱ、4％组织细胞固定液、二甲基
                         2+
        细胞质中的Ca 重新摄取到肌浆网中，使心肌细胞松弛，                          亚砜、CCK-8 试剂盒、胰蛋白酶-乙二胺四乙酸消化液、
                     2+
                                [5]
                          2 +
        从而维持细胞内 Ca 稳态 ；PLB 可影响 SERCA2a 与                    蛋白酶抑制剂、BCA 蛋白浓度检测试剂盒、十二烷基硫
        Ca 的亲和力进而调节 Ca 的摄取，主要通过 SERCA2a                     酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）凝胶制备试剂
                               2+
           2+
                 [6]
        发挥作用 。上述心肌收缩蛋白通过调控心肌细胞内                             盒、溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）（北京索莱宝科技有限公
           2+
        Ca 稳态来保持心肌收缩力，其异常表达是心功能降低                           司，批号分别为 12100、C8150、P1110、D8371、CA1210、
        和心室重构的重要原因 。                                        20190606、P0100、PC0020、P1200、IB0260），RIPA细胞裂
                            [7]
            槲皮素（quercetin，Que）是天然黄酮类物质，具有抗                  解液（美国Thermo Fisher Scientific公司，批号OC183166），
        炎、抗增殖、抗动脉粥样硬化等多种生物学活性                    [8－9] 。有   Trizol 试 剂（美 国 Ambion Life 公 司 ，批 号 103105），
                                                     2+
        研究发现，Que可调节心肌收缩蛋白、维持细胞内Ca 稳                         INTERFERin 转染试剂（法国 Polyplus Transfection 公
                                                                       ®
        态 、改 善 心 肌 收 缩 力     [10] ，但 其 是 否 可 通 过 作 用 于      司，批号 PT-409-10），Opti-MEM 培养基（美国Gibco公
                                                                                       TM
        ACE2-Ang-（1-7）-Mas 轴来影响心肌收缩蛋白的表达，                   司，批号 31985062），甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）
        尚不明确。本研究采用 RNA 干扰的方法沉默 ACE2 基                       兔 多克隆抗体（武汉三鹰生物技术有限公司，批号
        因来阻断 ACE2-Ang-（1-7）-Mas 轴上游，以探讨 Que 是               10494-1-AP），ACE2 兔多克隆抗体、NCX 小鼠单克隆抗
        否通过该信号轴调控心肌收缩蛋白；并使用Mas受体的                           体、SERCA2a 兔多克隆抗体、PLB 兔多克隆抗体（美国
        特异性拮抗剂 A779 同 Ang-（1-7）竞争性地与 Mas 结合                 GeneTex 公 司 ，批 号 分 别 为 GTX101395、GTX22869、
        来阻断该信号轴下游 ，以进一步验证 Que 是否通过该                         GTX22861、TX109254），Ang-（1-7）兔多克隆抗体（武汉
                           [11]
        信号轴调控心肌收缩蛋白。                                        优尔生商贸有限公司，批号 PAS085Ra01），Mas 兔多克
        1 材料                                                隆抗体、反转录试剂盒（美国 Invitrogen 公司，批号分别
        1.1  主要仪器                                           为 PA5-43668、4368814），PVDF 膜（美国 Millipore 公司，
            本研究使用的主要仪器包括SpectraMax M3型酶标                    批号ISEQ00010）。


        ·2840 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 23                                 中国药房    2021年第32卷第23期
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