Page 55 - 《中国药房》2021年22期

and its mechanism may be assicated with inhibiting the expression of TLR4，NF-κB p65 and inhibiting inflammatory response.
KEYWORDS Xinmaikang；Atherosclerosis；TLR4/NF-κB signaling pathway；Lipid metabolism；Inflammatory response；Rabbit

动脉粥样硬化（AS）是动脉硬化性血管疾病中重要 Thermo Fisher Scientific 公司；白细胞介素 1β（IL-1β）、
且常见的一种，是多种心脑血管疾病（如冠心病、血栓栓 IL-6酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒和TLR4、NF-κB
塞性疾病和脑血管病等）的病理基础 。进入21世纪以 p65 免疫组化试剂盒（批号分别为 A13267、A12347、
[1]
来，全球AS的发病率呈逐年上升趋势，对人类健康造成 A12567、A17267）均购自美国 ABclonal Technology 公
了严重威胁 。AS的发病机制尚未明确。近年来，多项 司；苏木精染液、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
[2]
研究提示，慢性炎症在 AS 的发生发展中发挥着重要作 （SDS-PAGE）试剂盒、二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量试剂
用 [3 － 4] 。 Toll 样 受 体 4（TLR4）作 为 Toll 样 受 体 家 族 盒、ECL 化学发光试剂盒（批号分别为 C0107、P0012A、
（TLRs）中的一员，与配体结合后能够促进核因子κB P0012S、P0018FS）均购自上海碧云天生物技术有限公
（NF-κB）发生核转移，从而激活下游炎症因子参与到AS 司；山羊抗小鼠 TLR4 单克隆抗体、山羊抗小鼠 NF-κB
的各个阶段，故抑制 TLR4/NF-κB 信号通路可能是改善 p65 多克隆抗体、山羊抗小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶
AS的潜在机制之一 [5－6] 。 （GAPDH）多克隆抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的
现代医学对AS的治疗方法包括手术治疗与药物治 山羊抗小鼠免疫球蛋白G（IgG）二抗（批号分别为1358、
疗，但二者均存在一定的局限性，如患者经皮冠状动脉 8242、5174、7074）均购自美国 Cell Signaling Technology
腔内成形术后易发生再狭窄，长期服用他汀类药物会对 公司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为蒸
其肝脏、肌肉、肾脏以及糖代谢等造成负面影响，二者联 馏水。
合则可能引发横纹肌溶解 [7－8] 。中医认为，AS属本虚标 1.3 实验动物
实之证，阴虚、阳虚、气虚为本，血瘀、痰浊、气滞、热毒、 本研究所用实验动物为普通级 5 月龄雄性新西兰
寒凝为标，可归“脉痹”“积聚”的范畴 。心脉康由广州 兔，共50只，体质量1.8～2.3 kg，由广州中医药大学实验
[9]
中医药大学东莞医院叶小汉教授创方，以鳖甲、三棱、莪 动 物 中 心 提 供 ，动 物 使 用 许 可 证 号 为 SYXK（粤）
术、枳实、制胆星和石斛等药材组成，具有软坚散结、益 2018-0001。所有动物均饲养于普通级动物实验室内，
[10]
气通脉的功效 。临床研究证实，心脉康对 AS 患者具 温度为20～26 ℃，相对湿度为40％～70％，昼夜明暗交
有显著的治疗作用 [11－12] ，但其分子机制尚未明确。本研 替（12 h/12 h）。高脂饲料（含1％胆固醇、5％猪油、94％
究通过观察心脉康对兔AS的影响，基于TLR4/NF-κB信 普通饲料）、普通饲料均由广州中医药大学实验动物中
号通路探究其改善兔 AS 的作用机制，旨在为心脉康的 心提供。本研究方案已通过广州中医药大学实验动物
机制研究提供参考。 管理和伦理委员会批准，批件号为ZSLL-2015-45。
1 材料 2 方法
1.1 主要仪器 2.1 造模
本研究所用主要仪器包括 BX41TF 型光学显微镜 参考文献[13]，采用高脂饲料喂养与腹主动脉内膜
（日本 Olympus 公司）、LEO-1430VP 型扫描电子显微镜 球囊损伤结合的方法复制兔AS模型，具体操作如下：用
（德国 Zeiss 公司）、Modular P800 型全自动生化分析仪 高脂饲料（100 g/d）喂养新西兰兔2 周后，再行腹主动脉
（瑞士Roche公司）、BondmaX型全自动免疫组化染色机 内膜球囊损伤术——经耳缘静脉注射戊巴比妥钠（30
（德国 Leica 公司）、Power Wave XS2 型酶标仪（美国 mg/kg）麻醉后，穿刺右股动脉，将内径3.5 mm、长15 mm
BioTek 公司）、JS-680A 型自动凝胶成像分析仪（上海培 的球囊导管送入腹主动脉（插入深度约2.0 cm），充盈球
清科技有限公司）等。 囊并缓慢回拉球囊至动脉切口处，反复回拉3次，以造成
1.2 主要药品与试剂 腹主动脉内膜损伤和剥脱，术后继续以高脂饲料喂养。
心脉康片（批号 Z20110041，规格 0.75 g）由东莞市 术后10周根据油红O的染色情况判断是否建模成功。
中医院提供；辛伐他汀片（批号R018651，规格20 mg）购 2.2 分组与给药
自荷兰 Merck Sharp V Dohme B.V.公司；0.5％油红 O 染 将50只新西兰兔以普通饲料喂养2周后，随机分为
液（货号 SLBG0158V）购自美国 Sigma 公司；三酰甘油 假手术组、模型组、辛伐他汀组[阴性对照，2.60 mg/（kg·d）]
（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、 和心脉康低、高剂量组[0.21、0.84 g/（kg·d）]，每组 10
高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒（批号分别为 只。假手术组兔给予普通饲料喂养，只分离结扎股动脉
23743986、23451355、23377464、23460238）均购自美国 但不损伤腹主动脉内皮，其余各组兔均按“2.1”项下方法

中国药房 2021年第32卷第22期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 22 ·2737 ·