Page 37 - 《中国药房》2021年20期
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1.5                                        （P＜0.01）。结果见图7、图8。
                                                           3.4  氯化镧对细胞中 TRAF6、IκBα、BMP-2、SM22α、
                          ＊＊  ＊＊
                             ＊＊
                          ＊＊
                1.0                                        Runx2 mRNA表达的影响
                                 ##       ΔΔ
                                 ##
                                    ## ##  ΔΔ
               OD                      ##     ## ##            与对照组比较，模型组和氯化钠组细胞中 TRAF6、
                                       ##
                0.5
                                                           BMP-2、Runx2 mRNA 的表达水平均显著升高，IκBα、
                                                           SM22α mRNA的表达水平均显著降低（P＜0.01）。与模
                 0
                   对照 氯化 模型 氯化 氯化 氯化 氯化 NF-κ B 阳性          型组比较，氯化镧各浓度组和阳性对照组细胞中TRAF6、
                    组  镧高  组  钠组 镧低 镧中 镧高 信号通 对照
                       浓度       浓度 浓度 浓度 路激动 组             BMP-2、Runx2 mRNA的表达水平均显著降低，IκBα（除
                       对照        组  组  组 剂 + 氯
                       组                  化镧组
                                                           氯化镧低浓度组外）、SM22α（除氯化镧低浓度组外）
           注：与对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.01；与氯化镧
                                          ##
                        ＊＊
                  ΔΔ
        高浓度组比较，P＜0.01                                      mRNA 的表达水平均显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01）。
                                                ##
           Note：vs. control group， ＊ ＊ P＜0.01；vs. model group，P＜0.01；  与氯化镧高浓度组比较，NF-κB 信号通路激动剂+氯化
        vs. lanthanum chloride high concentration group，P＜0.01
                                        ΔΔ
                                                           镧 组 细 胞 中 上 述 指 标 均 显 著 逆 转（P＜0.05 或 P＜
           图4 氯化镧对VSMCs钙化的影响（x±±s，n＝3）
                                                           0.01）。结果见图9。
        Fig 4 Effects of lanthanum chloride on calcification
              of VSMCs（x±±s，n＝3）                           4 讨论
                                                               钙在人体内大量存在，在激素分泌、递质释放、肌肉
        模型组比较，氯化镧中、高浓度组和阳性对照组VSMCs
                                                           收缩、神经传导等方面均起重要作用 。VSMCs向成骨
                                                                                           [13]
        细胞质中 TRAF6、BMP-2 蛋白的表达水平均显著降低，
                                                           样细胞转分化的过程涉及大量钙盐的生成 。钙盐染
                                                                                                 [14]
        IκBα、NF-κB p65、SM22α蛋白的表达水平和氯化镧低浓
                                                           色常用方法有茜素红 S 法 和 Von Kossa 法（即硝酸银
                                                                                  [15]
        度组细胞质中 SM22α蛋白的表达水平均显著升高（P＜
                                                               [16]
                                                           法） 。本研究采用这两种方法检测细胞钙沉积含量，
        0.05 或 P＜0.01）。与氯化镧高浓度组比较，NF-κB 信号
                                                           结果显示，低磷不会引起 VSMCs 钙化，高磷可引起
        通路激动剂+氯化镧组 VSMCs 细胞质中上述指标均显
                                                           VSMCs钙化，而氯化镧可抑制该钙化的发生。
        著逆转（P＜0.05或P＜0.01）。结果见图5、图6。
                                                               本课题组前期实验使用的是氢氧化镧，但由于氢氧
          TRAF6                                     57 kDa  化镧为混悬剂，难溶于水，不适宜用于细胞实验。为此，
           IκBα                                     36 kDa  本研究选用了可溶于水的氯化镧作为干预物，基于NF-κB
        NF-κB p65                                   65 kDa  信号通路探究其对高磷致 VSMCs 钙化的影响。另外，
          BMP-2                                     34 kDa  为了排除氯离子对实验的影响，本研究还设置了氯化钠
          SM22α                                     18 kDa  组进行对比。结果显示，氯化镧对 VSMCs 钙化有明显
          β-actin                                   42 kDa  的抑制作用且有浓度依赖的趋势，而氯化钠对 VSMCs
               对照组 氯化 模型组 氯化   氯化  氯化  氯化 NF-κ B  阳性       钙化并无抑制作用，由此推测发挥抑制作用的主要是镧
                   镧高      钠组  镧低  镧中  镧高 信号通   对照
                   浓度          浓度  浓度  浓度 路激动   组
                   对照           组   组   组  剂 + 氯           离子，而不是氯离子。同时，为了考察单用氯化镧对
                    组                     化镧组
        图 5  氯化镧对VSMCs细胞质中TRAF6、IκBα、NF-κB                 VSMCs 钙化的影响，本研究设置了氯化镧高浓度对照
             p65、BMP-2、SM22α蛋白表达影响的电泳图                     组进行对比。结果显示，氯化镧高浓度对照组无红色钙
        Fig 5 Electrophoretic maps of the effects of lantha-  沉积阳性细胞和黑色钙沉积物出现，表明单用氯化镧对
              num chloride on protein expression of TRAF6，  VSMCs钙化无影响。
              IκBα，NF-κB p65，BMP-2 and SM22α in cyto-          有研究表明，VSMCs 暴露于高磷条件下会诱导
              plasm of VSMCs                               NF-κB 的活化 。NF-κB 已成为 VSMCs 向成骨样细胞
                                                                        [17]
            与对照组比较，模型组和氯化钠组 VSMCs 细胞核                      转分化的关键调节因子 。NF-κB激活可增强碱性磷酸
                                                                               [18]
        中 Runx2、NF-κB p65 蛋白的表达水平均显著升高（P＜                  酶活性，上调 BMP-2、Runx2 表达，从而干扰 VSMCs 中
                                                                        [19]
        0.01）。与模型组比较，氯化镧各浓度组和阳性对照组                         的抗钙化途径 。本研究根据文献[6－7，20－22]筛选
        VSCMs 细胞核中 Runx2、NF-κB p65（除氯化镧低、中浓                NF-κB信号通路的相关蛋白，采用Western blot法考察了
        度组 NF-κB p65 外）蛋白的表达水平均显著降低（P＜                     氯化镧对高磷致钙化 VSMCs 中 TRAF6、IκBα、NF-κB
        0.01）。与氯化镧高浓度组比较，NF-κB 信号通路激动                      p65、BMP-2、SM22α和 Runx2 蛋白表达的影响。结果显
        剂+氯化镧组 VSCMs 细胞核中上述指标均显著逆转                         示，高磷条件可使 VSMCs 中 TRAF6 游离，促进 IκBα降




        中国药房    2021年第32卷第20期                                            China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 20  ·2463 ·
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