Page 25 - 《中国药房》2021年20期

disordered，the uterine coefficient，and the relative expression of HMGB1 mRNA and protein were increased significantly（P＜
0.01）. Compared with model group，the thickening of uterine myometrium and other symptoms were improved to different extents
in Xiaozheng decoction groups and positive control groups；the uterine coefficient，cell proliferation rate，migration rate，mRNA
and protein expression of HMGB1，the expression of p-Akt and IκBα，protein expression of PI3K and p-Akt（except for Xiaozheng
decoction low-dose group） in cytoplasm were all decreased significantly （P＜0.05 or P＜0.01）；the cell apoptosis rate，the
expression of p-TAK1，protein expression of NF-κB p65 in nucleus were all increased significantly（P＜0.05 or P＜0.01）. The
effects of Xiaozheng decoction showed a dose-dependent trend. CONCLUSIONS：Xiaozheng decoction can inhibit the proliferation
and migration of uterine leiomyoma cells by down-regulating the expression of HMGB1，PI3K and p-Akt，up-regulating the
expression of NF-κB p65，so as to promote cell apoptosis.
KEYWORDS Xiaozheng decoction；Uterine leiomyoma；HMGB1；PI3K/Akt；NF-κB；Rat

[21]
子宫平滑肌瘤是一种由雌激素水平过高引起的平 发率明显低于化学药米非司酮 。但消癥汤抑制子宫
滑肌细胞良性增生，临床表现为下腹部疼痛、月经周期 平滑肌瘤细胞的机制尚未明确。为此，本研究拟基于
缩短、白带增多、经量增多和经期延长等。子宫平滑肌 HMGB1 表达以及 PI3K/Akt、NF-κB 信号通路初步探讨
瘤虽然是一种良性肿瘤，但是如果不及时治疗，还是会 消癥汤抑制子宫平滑肌瘤细胞增殖和迁移的作用机制，
[1]
对患者身体造成极大的损伤，甚至可能导致不孕 。目 以期为该方在子宫平滑肌瘤临床治疗中的应用提供
[2]
前，除了手术治疗 外，还有多种中药 [3－4] 和化学药 [5－6] 在 参考。
实验室和临床上被证实可以有效缓解和治疗子宫平滑 1 材料
肌瘤。与化学药治疗相比，传统的中药因具有副作用 1.1 主要仪器
少、来源广泛等优点，被临床广泛关注和使用。 本研究所用主要仪器包括 Form Steri-Cycle 型 CO2
高迁移率族蛋白B1（HMGB1）是一种高度保守的核 培养箱（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），Axio Vert.
蛋白，在哺乳动物细胞中普遍表达。有研究指出， A1型倒置光学显微镜（德国Zeiss公司），DYCP-31DN型
HMGB1 可通过激活促炎性细胞因子[肿瘤坏死因子α 电泳仪、DYCZ-40D 型转膜仪（北京六一生物科技有限
（TNF-α）和白细胞介素 6（IL-6）等]来参与脓毒症、类风 公司），Amersham ImageQuant 800 型多功能成像仪（美
湿性关节炎、结肠炎和急性肺损伤等多种疾病的晚期炎 国GE公司），HHM-SY96S型多功能酶标仪（深圳恒美生
症反应 [7－10] 。此外，HMGB1在子宫平滑肌瘤和子宫内膜 物技术有限公司），Guava easyCyte HT型流式细胞仪（美
[11]
癌组织中呈高表达 ，并且可能对子宫平滑肌瘤细胞的 国Millipore公司），LightCycler480型荧光定量聚合酶链
增 殖 具 有 一 定 的 促 进 作 用 [12] 。 有 研 究 表 明 ，干 扰 反应（RT-qPCR）分析仪（瑞士Roche公司）等。
HMGB1蛋白的表达可以抑制膀胱癌细胞和血管瘤内皮 1.2 主要药品与试剂
细胞的增殖，并诱导其凋亡 [13－14] 。 米非司酮片（批号 43050609，规格 25 mg）购自华润
细胞内应激与凋亡反应可以程序性地诱导细胞凋 紫竹药业有限公司；桂枝茯苓胶囊（批号 120805，规格
[15]
亡或自噬，进而引起多种组织损伤 。磷脂酰肌醇 3 激 0.31 g）购自江苏康缘药业股份有限公司；MTT、Ⅰ型胶
酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路是细胞内重要的信 原 酶 、0.25％ 胰 酶 、胎 牛 血 清（批 号 分 别 为 M6494、
号转导通路之一，可调控包括 HMGB1 在内的多种蛋白 17100017、25200072、10099141）均购自美国Gibco公司；
的表达，同时也参与调节细胞内应激与凋亡反应 [16－18] 。 青霉素-链霉素双抗溶液、DMEM/F12培养基（批号分别
核因子κB（NF-κB）可通过调控细胞核内基因的转录，参 为 J130061、SH30023.01B）均购自美国 Hyclone公司；台
与细胞对应激等刺激的反应 。有研究表明，通过直接 盼蓝溶液（批号 R03130101）购自友康恒业生物科技（北
[19]
控制或间接调控PI3K/Akt和NF-κB信号通路的激活，可 京）有限公司；D-Hanks试液（批号20150504）购自北京索
以有效缓解细胞应激产生的负面影响，如炎症等 [19－20] 。 莱宝科技有限公司；膜联蛋白Ⅴ-别藻蓝蛋白（Annexin Ⅴ-
消癥汤由半枝莲、白花蛇舌草、三棱、莪术、乳香、没 APC）细 胞 凋 亡 检 测 试 剂 盒（含 结 合 缓 冲 液 ，批 号
药、橘核、皂角刺、海藻、牡蛎、石见穿和荔枝核等药材组 20151218）购自江苏凯基生物技术股份有限公司；二喹
[21]
成，具有清热利湿、活血止癥的功效 。在该汤剂中，半 啉甲酸（BCA）蛋白定量试剂盒、ECL 发光液（批号分别
枝莲、石见穿和白花蛇舌草是中医常用的抗癌药物，三 为 23225、32209）均购自美国 Thermo Fisher Scientific 公
棱、莪术、乳香、没药可理气行血、活血化瘀，橘核、荔枝 司；脱脂奶粉（批号 P0216）购自上海碧云天生物技术有
核可祛寒止痛、散结消肿，皂角刺可消肿排脓、疏通经 限公司；兔源 HMGB1 多克隆抗体、小鼠源β-肌动蛋白
络，海藻可化痰消肿、软坚散结，牡蛎可镇惊安神、滋阴 （β-actin）单克隆抗体、小鼠源 PI3K 单克隆抗体、兔源磷
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补虚 。前期临床研究发现，消癥汤可有效缩小患者子 酸化 Akt（p-Akt）多克隆抗体、兔源 NF-κB p65 多克隆抗
宫平滑肌瘤大小，可减轻其焦虑以及改善其贫血，且复 体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的兔源核纤层蛋白 B1

中国药房 2021年第32卷第20期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 20 ·2451 ·