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观察并拍照（染色的部位是心肌细胞膜，呈绿色）。采用 3 结果
Image J v1.8.0软件分析心肌细胞横截面积。 3.1 右美托咪定对心肌肥厚模型家兔EAD和Tdq诱发
2.8 家兔心肌组织中ANP、BNP mRNA表达水平检测 率的影响
采用荧光定量PCR法进行检测。取“2.6”项下各组 与假手术组比较，模型组家兔EAD和Tdp诱发率均
家兔米粒大小的心肌组织，破碎后，加入Trizol试剂裂解 显著升高（P＜0.05），且达到 100％。与模型组比较，右
组织，提取总 RNA，测定纯度和浓度后，取总 RNA 40 美托咪定低、中、高剂量组和KN-93组、右美托咪定高剂
ng，按逆转录试剂盒说明书操作以逆转录合成cDNA，按
量+KN-93 组家兔 EAD 和 Tdp 诱发率均显著降低（P＜
照1∶35的体积比将cDNA与SYBR Premix Ex Taq混合，
0.05），且右美托咪定高剂量组显著低于右美托咪定低、
进行PCR反应。反应条件如下：95 ℃预变性30 s；95 ℃
中剂量组（P＜0.05）。与右美托咪定高剂量组和 KN-93
变性5 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸40 s，共40个循环。反
组比较，右美托咪定高剂量+KN-93 组家兔 EAD 和 Tdp
应体系（10 μL）如下：上、下游引物（用无核酸酶水稀释至
诱发率均显著降低（P＜0.05），详见表1。
1 μmol/L）5 μL，cDNA-SYBR混合液（体积比1∶35）5 μL。
表 1 右美托咪定对心肌肥厚模型家兔 EAD 和 Tdp 诱
ANP 上 游 引 物 序 列 为 5′-TGACGGACAAAAGCT-
发率的影响（n＝10）
GAGA-3′，下游引物序列为 5′-CAGGGTGATGGAGA-
Tab 1 Effects of dexmedetomidine on induction rate
AGGAG-3′，产物片段长度为179 bp；BNP上游引物序列
of EAD and Tdp in myocardial hypertrophy
为 5′-AAGGGAGAACACGGCAT-3′，下游引物序列为
model rabbits（n＝10）
5′-CAGAGGATGGGAGTGACC-3′，产 物 片 段 长 度 为
114 bp；18S rRNA 上游引物序列为 5′-AGGGGAGAGC- 组别 EAD，％ Tdq，％
假手术组 0 0
GGGTAAGAGA-3′，下游引物序列为5′-GGACAGGAC- 模型组 100 ＊ 100 ＊
TAGGCGGAACA-3′，产 物 片 段 长 度 为 140 bp。 以 右美托咪定低剂量组 90 ＊#Δ 90 ＊#Δ
右美托咪定中剂量组 80 ＊#Δ 70 ＊#Δ
18S rRNA 为内参，利用 2 －ΔΔCt 法分析各组家兔心肌组织
右美托咪定高剂量组 60 ＊# 50 ＊#
中ANP、BNP mRNA的相对表达量。 KN-93组 40 ＊# 30 ＊#
2.9 家兔心肌组织中CaMKⅡⅡ、p-CaMKⅡⅡ蛋白表达水 右美托咪定高剂量+KN-93组 20 ＊#Δ□ 10 ＊#Δ□
#
＊
平检测 注：与假手术组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05；与右美
□
托咪定高剂量组比较，P＜0.05；与KN-93组比较，P＜0.05
Δ
采用Western blot法进行检测。取“2.6”项下各组家
#
＊
Note：vs. sham operation group， P＜0.05；vs. model group，P＜
兔左心室游离壁的心肌组织适量，用液氮混匀并研磨
0.05；vs. dexmedetomidine high-dose group，P＜0.05；vs. KN-93 group，
Δ
后，使用RIPA裂解液在冰上充分裂解提取蛋白，将蛋白
□
P＜0.05
与 loading buffer 混合并煮沸变性。取变性后的蛋白适
3.2 右美托咪定对心肌肥厚模型家兔LVEF、FS的影响
量，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，湿
与假手术组比较，模型组家兔LVEF、FS均显著降低
法转移至聚偏二氟乙烯膜上，用 5％脱脂牛奶于室温下
（P＜0.01）。与模型组比较，右美托咪定中、高剂量组和
封闭 1 h；加入 CaMKⅡ、p-CaMKⅡ、GAPDH 一抗（稀释
KN-93 组、右美托咪定高剂量+KN-93 组家兔 LVEF、FS
度均为1 ∶ 1 000），4 ℃下孵育过夜；经TBST洗涤液洗膜
均显著升高（P＜0.05或P＜0.01），且右美托咪定高剂量
后，加入相应二抗（稀释度为1∶10 000），室温孵育1 h；经
组显著高于右美托咪定中剂量组（P＜0.05）。与右美托
TBST洗涤液洗膜后，采用化学发光法显影，并使用凝胶
咪定高剂量组和 KN-93 组比较，右美托咪定高剂量+
成像系统成像。采用 Image J v1.8.0 软件对蛋白条带的
KN-93 组家兔 LVEF、FS 均显著升高（P＜0.05），详见
灰度值进行分析，以目标蛋白与内参蛋白（GAPDH）条
图1。
带的灰度值比值作为目标蛋白的相对表达量。
2.10 统计学方法 3.3 右美托咪定对心肌肥厚模型家兔QT间期、TDR和
采用 SPSS 22.0 软件对数据进行统计分析。采用 内、外膜心肌APD90的影响
Shapiro-Wilk 检验分析计量资料是否符合正态分布，采 与假手术组比较，模型组家兔QT间期和内、外膜心
用单因素方差分析检验其方差齐性。若数据服从正态 肌 APD90 均显著延长，TDR 显著增加（P＜0.05）。与模
分布且方差齐，以 x±s 表示，采用 SNK-q 检验进行组间 型组比较，右美托咪定低、中、高剂量组和 KN-93 组、右
比较；若不符合正态分布，则以中位数表示，采用非参数 美托咪定高剂量+KN-93组家兔QT间期和内、外膜心肌
检验进行组间比较。计数资料以率表示，采用χ 检验进 APD90均显著缩短，TDR均显著减小（P＜0.05），且右美
2
行组间比较。检验水准α＝0.05。 托咪定高剂量组 QT 间期、TDR 均显著短于或小于右美

·2212 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 18 中国药房 2021年第32卷第18期