Page 58 - 《中国药房》2021年16期

35 表 3 15 批地稔醇提物体外抗氧化活性的测定结果
30 （n＝3）
25
3
mAU 20 （没食子酸） Tab 3 Antioxidant activity in vitro of 15 batches of
15
13
10 （牡荆素） ethanol extracts from M. dodecandrum（n＝3）
17
5 （芦丁）
0 编号 DPPH法的IC50，μg/mL ABTS法的IC50，μg/mL FRAP值，mg/mL
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 S1 39.42 65.97 0.29
t，min S2 39.06 71.96 0.29
A.混合对照品溶液
S3 46.98 57.67 0.36
35 S4 35.32 67.18 0.35
30
25 S5 43.91 60.29 0.28
mAU 20 S6 57.87 101.88 0.19
21.98
S7
40.94
0.48
15
19
10 （鞣花酸） S8 38.52 66.63 0.28
5
0 S9 29.58 55.63 0.36
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 S10 32.70 56.33 0.33
t，min S11 44.00 74.78 0.29
B.单一对照品溶液 S12 34.34 57.93 0.33
图2 混合对照品溶液和单一对照品溶液的高效液相色 S13 40.37 85.99 0.23
谱图 S14 37.95 63.74 0.31
S15 37.02 57.33 0.30
Fig 2 HPLC chromatograms of mixed control and
single control solution 180 μL（样品组）、“2.5.1”项下不同质量浓度的抗氧化活
性用供试品溶液各 20 μL+水 180 μL（对照组），置于 96
2.5 抗氧化活性的评价
孔板中，于室温下静置 30 min，置于酶标仪中振荡 6
2.5.1 DPPH 自由基清除法 参考文献[16]方法，精密
称取DPPH 16.51 mg，置于10 mL棕色量瓶中，加无水乙 min，于 734 nm 波长处分别测定其吸光度，依次记为 A0
（空白组）、A1 （样品组）和A2 （对照组）。按“2.5.1”项下方
醇，超声（功率420 W，频率40 kHz）使其溶解，冷却至室
法计算15批地稔醇提物对ABTS自由基的IC50。每组设
温后以无水乙醇定容，即得DPPH工作液。分别取50％
3个平行样，结果见表3。
乙醇 100 μL+DPPH工作液 100 μL（空白组）、不同质量
2.5.3 FRAP 法 参 考 文 献 [18] 方 法 ，取 FRAP 工 作
浓度的抗氧化活性用供试品溶液（分别取“2.1.2”项下抗
液[精密吸取 300 mmol/L 醋酸-醋酸钠缓冲液（pH 3.6）
氧化活性用供试品溶液 1、2、3、4、5、6、7、8 mL，用 50％
2.5 mL、10 mmol/L TPTZ溶液（以40 mmol/L的盐酸为溶
乙醇定容至 25 mL 量瓶中，下同）各 100 μL+DPPH 工作
剂）250 μL、20 mmol/L 氯化铁溶液250 μL，混匀]180 μL，
液 100 μL（样品组）以及上述质量浓度的抗氧化活性用
供试品溶液各 100 μL+无水乙醇 100 μL（对照组），置于 置于96孔板中，加入0.2 mg/mL（用50％乙醇稀释）的抗
96 孔板中，于室温下静置 15 min，置于酶标仪中振荡 10 氧化活性用供试品溶液 20 μL，置于酶标仪中，在 37 ℃
下静置10 min后，于593 nm波长处测定其吸光度，记为
min，于 517 nm 波长处分别测定其吸光度，依次记为 A0
（空白组）、A1 （样品组）和A2 （对照组）。按下式计算自由 A。另分别配制质量浓度为 0.019 3、0.038 6、0.058 0、
基 清 除 率 ：自 由 基 清 除 率（％）＝[1 －（A1 － A2 ）/A0] × 0.077 3、0.096 6、0.159 2 mg/mL 的硫酸亚铁溶液，按上
100％，采用 SPSS 25.0 软件计算 15 批地稔醇提物对 述方法测定吸光度后绘制标准曲线。将供试品溶液的A
DPPH 自由基的半数抑制浓度（IC50 ）。每组设 3 个平行 值代入标准曲线方程计算总抗氧化能力（以硫酸亚铁质
样，结果见表3。 量浓度计，后简称为“FRAP 值”）。每组设 3 个平行样，
2.5.2 ABTS 自由基清除法 参考文献[17]方法，精密 结果见表3。
称取ABTS 38.41 mg，置于10 mL棕色量瓶中，加水溶解 2.6 谱效关系分析
并稀释至刻度；另精密称取过硫酸钾66.10 mg，置于100 2.6.1 主成分分析 采用 SPSS 25.0 软件，对共有峰峰
mL 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。将上述 ABTS 溶 面积与 DPPH 法的 IC50 值（Y1 ）、ABTS 法的 IC50 值（Y2 ）、
液与过硫酸钾溶液等体积混合，避光储存 12～16 h 后， FRAP 值（Y3 ）进行 Z 标准化处理，计算主成分特征值、方
用水稀释，使其在 734 nm 波长处的吸光度为 0.70± 差贡献率等参数。结果，主成分 Y1 的方差贡献率达
0.02，即得 ABTS 工作液。分别取 50％乙醇 20 μL+ 80.77％，提示其能较大程度地反映地稔醇提物的抗氧化
ABTS 工作液 180 μL（空白组）、“2.5.1”项下不同质量浓 活性，详见表 4。因此，本研究选用 DPPH 法的 IC50值作
度的抗氧化活性用供试品溶液各 20 μL+ABTS 工作液 为抗氧化活性的变量进行后续分析。

·1972 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 16 中国药房 2021年第32卷第16期