Page 57 - 《中国药房》2021年16期

色谱柱，以甲醇为流动相 A、0.1％磷酸溶液为流动相 B 340 5
320
进行梯度洗脱（0～10 min，98％A；10～15 min，98％A→ 300 14
280
260 15
95％A；15～55 min，95％A→75％A；55～60 min，75％A； 240 9 10 13 16 17 20
220 12 3 4 6 7 8 11 12 18 19
200
60～75 min，75％A→65％A；75～90 min，65％A→55％A； mV 180
U， 160
90～95 min，55％A→50％A；95～100 min，50％A→98％A； 140
120
100
100～105 min，98％A）；流速为 1.0 mL/min，检测波长为 80
60
40
260 nm；柱温为30 ℃；进样量为10 μL。 20 0
2.3 方法学考察 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105
t，min
2.3.1 精密度试验 取地稔药材（编号 S6）适量，按 A.叠加指纹图谱
“2.1.2”项下方法制备指纹图谱用供试品溶液，再按“2.2” 56 5
52
项下色谱条件连续进样6次。以没食子酸峰（峰3，该峰 48
44
40
分离度良好、峰面积相对较大且稳定）为参照，计算各共 36
有峰的相对峰面积和相对保留时间。结果，20个共有峰 mV U， 32
28
24
相对峰面积的RSD均不高于1.69％（n＝6），相对保留时 20 9 16
16 10 13 17
间的 RSD 均不高于 0.71％（n＝6），表明方法精密度 12 8 3 4 6 12 14 19 20
4 1 2 7 8 11 15 18
良好。 0
2.3.2 重复性试验 取地稔药材（编号 S6）适量，共 6 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105
t，min
份，按“2.1.2”项下方法制备指纹图谱用供试品溶液，再 B.对照指纹图谱
按“2.2”项下色谱条件进样测定。以没食子酸峰为参照， 图1 15批地稔醇提物的HPLC叠加指纹图谱和对照指
计算各共有峰的相对峰面积和相对保留时间。结果，20 纹图谱
个共有峰相对峰面积的RSD均不高于2.16％（n＝6），相 Fig 1 HPLC superimposed fingerprint and control
对保留时间的RSD均不高于0.63％（n＝6），表明方法重 fingerprint of 15 batches of ethanol extracts
复性良好。 from M. dodecandrum
2.3.3 稳定性试验 取地稔药材（编号 S6）适量，按 表2 15批地稔醇提物的相似度评价结果
“2.1.2”项下方法制备指纹图谱用供试品溶液，分别于室 Tab 2 Similarity evaluation of 15 batches of ethanol
温下放置0、2、4、8、10、24 h时按“2.2”项下色谱条件进样 extract from M. dodecandrum
测定。以没食子酸峰为参照，计算各共有峰的相对峰面 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 R
积和相对保留时间。结果，20 个共有峰相对峰面积的 S1 1.000 0.830 0.925 0.889 0.889 0.914 0.873 0.844 0.955 0.923 0.917 0.788 0.780 0.970 0.978 0.962
S2 0.830 1.000 0.873 0.650 0.785 0.873 0.792 0.733 0.717 0.853 0.922 0.647 0.807 0.809 0.752 0.831
RSD均不高于2.49％（n＝6），相对保留时间的RSD均不 S3 0.925 0.873 1.000 0.897 0.871 0.999 0.939 0.896 0.887 0.926 0.969 0.839 0.902 0.949 0.910 0.974
高于 1.48％（n＝6），表明供试品溶液在室温下放置 24 h S4 0.889 0.650 0.897 1.000 0.702 0.896 0.777 0.738 0.846 0.763 0.810 0.675 0.655 0.872 0.892 0.885
S5 0.889 0.785 0.871 0.702 1.000 0.857 0.966 0.973 0.948 0.989 0.901 0.953 0.914 0.937 0.905 0.945
内稳定。
S6 0.914 0.873 0.999 0.896 0.857 1.000 0.931 0.888 0.870 0.916 0.968 0.829 0.898 0.936 0.895 0.966
2.4 地稔醇提物HPLC指纹图谱的建立、相似度评价和 S7 0.873 0.792 0.939 0.777 0.966 0.931 1.000 0.992 0.927 0.977 0.932 0.969 0.967 0.948 0.900 0.969
共有峰指认 S8 0.844 0.733 0.896 0.738 0.973 0.888 0.992 1.000 0.922 0.968 0.902 0.988 0.953 0.922 0.877 0.947
S9 0.955 0.717 0.887 0.846 0.948 0.870 0.927 0.922 1.000 0.949 0.868 0.898 0.822 0.979 0.987 0.966
2.4.1 HPLC指纹图谱的建立 按“2.1.2”项下方法制备
S10 0.923 0.853 0.926 0.763 0.989 0.916 0.977 0.968 0.949 1.000 0.949 0.931 0.929 0.959 0.925 0.973
15 批地稔药材的指纹图谱用供试品溶液，再按“2.2”项 S11 0.917 0.922 0.969 0.810 0.901 0.968 0.932 0.902 0.868 0.949 1.000 0.839 0.914 0.920 0.875 0.957
下色谱条件进样分析，记录色谱图。将色谱数据导入 S12 0.788 0.647 0.839 0.675 0.953 0.829 0.969 0.988 0.898 0.931 0.839 1.000 0.941 0.884 0.838 0.904
S13 0.780 0.807 0.902 0.655 0.914 0.898 0.967 0.953 0.822 0.929 0.914 0.941 1.000 0.872 0.794 0.902
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 版）》，以 S1
S14 0.970 0.809 0.949 0.872 0.937 0.936 0.948 0.922 0.979 0.959 0.920 0.884 0.872 1.000 0.987 0.988
样品图谱为参照图谱，将时间窗宽度设为 0.3 min，采用 S15 0.978 0.752 0.910 0.892 0.905 0.895 0.900 0.877 0.987 0.925 0.875 0.838 0.794 0.987 1.000 0.967
多点校正法进行峰匹配生成叠加指纹图谱，采用中位数 R 0.962 0.831 0.974 0.885 0.945 0.966 0.969 0.947 0.966 0.973 0.957 0.904 0.902 0.988 0.967 1.000
法生成对照指纹图谱（R），详见图1。 2.4.3 共有峰指认 从 15 批地稔醇提物样品的指纹图
2.4.2 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似度评 谱中确定共有峰 20 个，通过与对照品色谱图（“2.1.1”项
价系统（2012 版）》对 15 批地稔醇提物样品的指纹图谱 下对照品溶液同法进样测定所得，见图 2）进行比对，指
进行相似度评价。结果，15批地稔醇提物样品图谱与对 认出峰 3 为没食子酸、峰 13 为牡荆素、峰 17 为芦丁、峰
照指纹图谱的相似度均不低于0.831，详见表2。 19为鞣花酸。

中国药房 2021年第32卷第16期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 16 ·1971 ·