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expression of MAP-2 protein in cerebral cortex and down-regulating the expression of GFAP and AQP-4 protein in brain tissue.
KEYWORDS Protocatechuic aldehyde；Cerebral ischemia-reperfusion injury；Neurovascular unit；Cerebral cortex；Rats

《中国脑卒中防治报告（2018）》显示，脑卒中居我国 （瑞士Precisa公司）、CF16RXⅡ型低温高速离心机（日本
死亡原因之首 。其中，缺血性脑卒中（ischemic stroke， Hitachi Koki 公司）、UVP 型显色系统（美国 Spectrum 公
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IS）是脑卒中发病率最高的病种，其是由于脑血流的突 司）、Cryo Star 型冰冻切片机（德国 Leica 公司）、JEM-
然中断导致脑细胞死亡和神经缺陷的一类疾病 。在IS 1400Flash型透射电镜（日本电子株式会社）。
[2]
的病理发展过程中，血栓脱落、血栓自溶以及缺血区侧 1.2 主要药品与试剂
支循环的建立与开放等均会引起缺血区的血流重建，从 本研究所用主要药品与试剂有：原儿茶醛（北京百
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而造成脑缺血再灌注损伤（CIRI），进而导致 IS 恶化 。 灵威科技有限公司，批号 P13N，纯度 98％），TTC 试剂
IS的发生不仅影响神经元，还影响位于“胶质细胞-神经 （上海惠世生化试剂有限公司，批号 120808），多聚甲醛
细胞-血管小生态环境”中的所有脑细胞、细胞外基质和 （天津化学试剂研究所，批号20100525），水合氯醛（广东
机体免疫系统。基于此，美国国家神经疾病和中风学会 光华化学厂有限公司，批号 20100926），兔抗 MAP-2 多
提出了“脑神经血管单元（neurovascular unit，NVU）”的 克隆抗体（美国 Abcam 公司，批号 GR288637-1），鼠抗
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概念 ，为临床治疗IS提供了新的策略——NVU稳态的 AQP-4多克隆抗体、兔抗GFAP多克隆抗体、兔抗β-actin
治疗，强调从整体研究脑神经血管系统的损伤及其机 单克隆抗体、异硫氰酸荧光素（FITC）标记的免疫球蛋白
制，对IS的治疗从单一环节扩展为对 NVU 各细胞成分 G（IgG）二抗、化学发光显影剂（美国Proteintech公司，批
的全面保护，以维持脑微环境的整体稳定，促进神经元 号分别为C520BA0013、00023078、10004157、20000003、
存活和神经功能的恢复，以期达到降低IS致残率和病死 B2202003），二喹啉甲酸（BCA）蛋白浓度测定试剂盒（上
率的目标 [5－7] 。 海碧云天生物技术有限公司，批号090119191205）；其余
NVU 由神经元、星形胶质细胞（Ast）、小胶质细胞、 试剂为实验室常用规格，水为纯净水。
血脑屏障（BBB）等成分组成 [8－10] ；当脑缺血再灌注后，部 1.3 动物
分神经元变性坏死、Ast足突水肿、小胶质细胞被大量激 本研究所用动物为 SPF 级 SD 大鼠，雄性，体质量
活，使得NVU的完整性被破坏，从而导致脑组织内环境 240～270 g，购自成都达硕实验动物有限公司，动物生产
的稳态失调 [11－12] 。 许可证号为SCXK（川）2020-020。大鼠每天定时供应食
原儿茶醛为天麻的酚类成分（结构式见图 1），具有 水，并定期更换垫料，饲养环境温度为 18～24 ℃、相对
保护 BBB、抗血小板聚集和抗神经炎症等作用；且经本 湿度为40％～60％，适应性喂养7 d后进行后续实验。
课题组前期研究发现，其对 IS 后的 CIRI 具有保护作 2 方法
用 [13－14] 。但是，原儿茶醛是否可通过作用于NVU发挥其 2.1 造模、分组与给药
保护CIRI的作用尚不明确。基于此，本研究建立大鼠脑 将48只大鼠随机分为假手术组、模型组和原儿茶醛
缺血再损伤模型，采用透射电镜观察 NVU 各组成成分 低、高剂量组（10、20 mg/kg，剂量根据前期研究结果和参
（BBB、神经元、胶质细胞）的结构变化，采用Western blot 考文献[13]设置），每组 11 只。给药组大鼠灌胃相应药
法和免疫荧光染色法，研究原儿茶醛干预后对 NVU 相 物（临用时以水进行溶解），假手术组和模型组大鼠灌胃
关蛋白[微管相关蛋白 2（MAP-2）、胶质纤维酸性蛋白 等体积水，灌胃体积均为 10 mL/kg，每天 1 次，连续 5 d。
（GFAP）、水通道蛋白（AQP-4）] [15－17] 表达水平的影响，以 末次给药后，对大鼠腹腔注射 10％水合氯醛（3 mL/kg）
期为探讨原儿茶醛对CIRI后NVU稳态破坏的保护作用 进行麻醉，并以仰卧位固定于37 ℃恒温加热鼠板上；参
提供参考。 考文献[18－20]中的线栓法，取大鼠颈正中偏右切口，暴
露右侧颈总动脉（CCA）和迷走神经并进行钝性分离。
将CCA远心端打一活结，近心端结扎，并在结扎上部剪
一“V”型小口，将栓线沿“V”型小口插入，直至尼龙线前
端到达大鼠大脑中动脉（MCA）起始处（线栓插入长度大
约为18～20 mm）；栓塞2 h后，缓慢轻拉尼龙栓线，以复
图1 原儿茶醛的化学结构式 制CIRI模型大鼠。假手术组大鼠同法分离血管后，不插
Fig 1 Chemical structure of PAL 入拴线。造模后，参考文献[21－22]方法，对大鼠进行神
1 材料 经学评分：0分为无神经功能缺损症状，1分为轻度局灶
1.1 主要仪器 性神经功能缺损（即提尾悬空不能伸展左侧前爪），2 分
本研究所用主要仪器有：Secura2250 型分析天平 为中度局灶性神经功能缺损（即行走时向左侧转圈），3

·1812 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 15 中国药房 2021年第32卷第15期