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项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图。以8号峰（尿
苷峰）为参照峰（S，该峰的保留时间相对居中且与其余
色谱峰的分离度良好），计算得16个共有峰相对保留时 3 000
间的 RSD 均小于 0.3％（n＝6）、相对峰面积的 RSD 均小 2 500
于0.5％（n＝6），表明该方法的精密度良好。 2 000
2.4.2 重复性试验 精密称取蚕蛹样品（编号CY-5）0.5
mV 1 500
g，共6份，分别按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，然 U，
后按照“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。以8 1 000
号峰为参照峰，计算得 16 个共有峰相对保留时间的 500
RSD 均小于 0.8％（n＝6）、相对峰面积的 RSD 均小于
0
0.9％（n＝6），表明该方法的重复性良好。 0 10 20 30 40 50
t，min
2.4.3 稳定性试验 精密称取蚕蛹样品（编号CY-5）0.5 A.叠加指纹图谱
g，按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，分别在室温下
400
放置0、2、4、8、12、24 h时按照“2.1”项下色谱条件进样测
350
定，记录色谱图。以8号峰为参照峰，计算得16个共有峰
300
相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2％（n＝6），表
250
明该供试品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。 mV 200
2.4.4 指纹图谱建立及相似度评价 精密称取 18 批蚕 U，
150
蛹样品各 0.5 g，按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶液， 100
然后分别按照“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱 50
图。将18批蚕蛹样品的HPLC图谱导入《中药色谱指纹 0
图谱相似度评价系统（2012版）》中，以样品CY-1的图谱
0 10 20 30 40 50
为参照图谱，设置时间窗宽度为 0.1 min，通过多点校正 t，min
B.对照指纹图谱
和色谱峰匹配生成样品叠加指纹图谱，采用中位数法生
图2 18批蚕蛹样品的HPLC叠加指纹图谱和对照指纹
成对照指纹图谱（R）；然后以对照指纹图谱为参照，进行
图谱（R）
各样品图谱的相似度评价。同时，通过将对照指纹图谱
Fig 2 HPLC superimposed fingerprint and control
与对照品色谱图（图1B）进行比对，进行色谱峰的指认。
fingerprint（R）of 18 batches of B. mori
结果，18批蚕蛹样品中共标定了16个共有峰；通过与对
照品色谱图比对，指认了其中4个共有峰，分别为尿嘧啶 表2 18批蚕蛹样品指纹图谱的相似度评价结果
（3 号峰）、鸟嘌呤（6 号峰）、黄嘌呤（7 号峰）和尿苷（8 号 Tab 2 Results of similarity evaluation of 18 batches of
峰）。各样品图谱与对照指纹图谱的相似度为 0.912～ B. mori
1.000，说明 18 批蚕蛹样品具有很高的相似性。18 批蚕 编号 相似度 编号 相似度
蛹样品的 HPLC 叠加指纹图谱和对照指纹图谱见图 2， CY-1 1.000 CY-10 0.912
CY-2 0.921 CY-11 0.997
相似度评价结果见表2。 CY-3 0.929 CY-12 0.996
2.5 4个核苷类成分的含量测定 CY-4 0.921 CY-13 0.929
CY-5 0.919 CY-14 0.958
2.5.1 线性关系考察 分别精密量取“2.2.2”项下混合
CY-6 0.939 CY-15 0.987
对照品贮备液 0.5、5、10、25、50 mL，置于不同的 100 mL CY-7 0.941 CY-16 0.958
量瓶中，加50％甲醇稀释并定容，摇匀，制成5个不同质 CY-8 0.912 CY-17 0.946
CY-9 0.997 CY-18 0.949
量浓度的线性工作液。将上述线性工作液分别按照
表3 4个待测成分的回归方程、相关系数、线性范围、检
“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以各待测成
分的质量浓度为横坐标（x，μg/mL）、峰面积为纵坐标（y） 测限和定量限
进行线性回归。结果，各待测成分均在其相应质量浓度 Tab 3 Regression equations，correlation coefficients，
范围内与其峰面积的线性关系良好（r均不低于0.999 8）， linear ranges，limits of detection and limits of
详见表3。 quantitation of 4 components to be tested
2.5.2 检测限和定量限考察 取“2.2.2”项下混合对照 待测成分 回归方程 r 线性范围，μg/mL 检测限，μg/mL 定量限，μg/mL
品贮备液，以50％甲醇倍比稀释，然后按照“2.1”项下色 尿嘧啶 y＝6 176.6x+8 084.9 0.999 8 5.34～534 0.032 4 0.106 8
鸟嘌呤 y＝2 145.8x+7 347.1 0.999 9 5.28～528 0.032 0 0.105 6
谱条件进样测定，记录峰面积。分别以信噪比3∶1、10∶1 黄嘌呤 y＝9 957.3x－31 845 0.999 8 5.06～506 0.030 7 0.101 2
计算待测成分的检测限和定量限，结果见表3。 尿苷 y＝5 427.1x－31 723 0.999 9 5.195～519.5 0.031 2 0.103 0

中国药房 2021年第32卷第14期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 14 ·1749 ·