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2.5.3 精密度试验 精密称取蚕蛹样品（编号CY-5）0.5
g，按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，然后按照“2.1”
项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，尿
嘧 啶 、鸟 嘌 呤 、黄 嘌 呤 、尿 苷 峰 面 积 的 RSD 分 别 为
0.21％、0.35％、0.24％、0.53％（n＝6），表明该方法的精
密度良好。
2.5.4 重复性试验 精密称取蚕蛹样品（编号CY-5）0.5
g，共6份，分别按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，然
后按照“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并采
用外标法计算各成分的含量。结果，尿嘧啶、鸟嘌呤、黄
嘌呤、尿苷含量的 RSD 分别为 0.51％、0.65％、0.44％、
0.59％（n＝6），表明该方法的重复性良好。
2.5.5 稳定性试验 精密称取蚕蛹样品（编号CY-5）0.5
g，按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，在室温下放置
0、2、4、8、12、24 h时分别按照“2.1”项下色谱条件进样测
定，记录峰面积。结果，尿嘧啶、鸟嘌呤、黄嘌呤、尿苷峰
面积的 RSD 分别为 0.71％、0.75％、0.64％、0.79％（n＝
6），表明该供试品溶液在室温放置24 h的稳定性良好。
2.5.6 准确度考察 取已知含量的蚕蛹样品（编号
CY-5）样品9份，每份0.25 g，精密称定，分别按已知量的
50％、100％、150％加入相应混合对照品溶液，每个质量
浓度平行操作 3 份，按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶
液，然后按照“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，
并计算4个成分的加样回收率。结果，尿嘧啶、鸟嘌呤、
黄 嘌 呤 、尿 苷 的 平 均 加 样 回 收 率 分 别 为 102.95％
（RSD＝1.79％，n＝9）、102.05％（RSD＝1.74％，n＝9）、
101.70％（RSD＝1.73％，n＝9）、100.15％（RSD＝1.82％，
n＝9），表明本方法的准确度良好，结果见表4。
2.5.7 蚕蛹样品中 4 个成分的含量测定 取 18 批蚕蛹
样品，分别按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，然后
按照“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并采用
外标法分别计算各成分的含量。结果，浙江产蚕蛹中尿
嘧啶、鸟嘌呤、黄嘌呤、尿苷的平均含量最高，分别为
2.28％、1.56％、2.45％、3.20％；其次是四川产蚕蛹，4 个
成分的平均含量分别为 1.09％、1.11％、2.00％、2.53％；
河北产蚕蛹中上述4个成分的含量最低，平均含量分别
为 0.57％、0.50％、0.85％、1.41％。可见，不同产地蚕蛹
样品中 4 个核苷类成分的含量差异较大。18 批蚕蛹样
品中4个核苷类成分的含量测定结果见表5。
3 讨论
3.1 样品提取方法的选择
在前期研究中，笔者分别采用甲醇、水、乙醇、30％
乙醇为提取溶剂进行蚕蛹样品的提取。结果显示，以甲
醇、乙醇、30％乙醇为样品的提取溶剂时，色谱图中色谱
峰信息量较少；而以水为提取溶剂时，色谱图中各色谱
峰的分离度均较好，且信息量较多，因此最终选用水作
为蚕蛹样品的提取溶剂。在此基础上，笔者又分别考察
了回流提取和超声提取两种提取方法对蚕蛹样品色谱
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表4 4个待测成分的加样回收率测定结果（n＝9）
Tab 4 Results of recovery tests of 4 components to be
tested（n＝9）
成分 已知量，mg 加入量，mg 测得量，mg 加样回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％
尿嘧啶 3.069 1 1.588 1 4.727 4 104.42 102.95 1.79
3.047 2 1.588 1 4.722 1 105.47
3.050 9 1.588 1 4.703 6 104.07
3.066 7 3.176 2 6.324 5 102.57
3.056 9 3.176 2 6.335 9 103.24
3.048 4 3.176 2 6.365 1 104.42
3.058 2 4.764 2 7.837 6 100.32
3.036 3 4.764 2 7.825 2 100.52
3.020 5 4.764 2 7.856 4 101.50
鸟嘌呤 2.006 3 1.099 1 3.126 6 101.93 102.05 1.74
2.025 6 1.099 1 3.158 8 103.10
2.028 0 1.099 1 3.175 1 104.37
2.038 5 2.198 3 4.221 5 99.30
2.032 1 2.198 3 4.210 8 99.11
2.026 4 2.198 3 4.301 5 103.49
2.032 9 3.297 1 5.404 3 102.25
2.018 3 3.297 1 5.388 6 102.22
1.989 8 3.297 1 5.375 1 102.68
黄嘌呤 3.621 3 1.874 2 5.552 1 103.02 101.70 1.73
3.595 5 1.874 2 5.539 8 103.74
3.599 8 1.874 2 5.478 7 100.25
3.618 4 3.748 3 7.439 0 101.93
3.607 0 3.748 3 7.469 6 103.05
3.596 9 3.748 3 7.481 3 103.63
3.608 4 5.622 1 9.180 4 99.11
3.582 6 5.622 1 9.195 7 99.84
3.564 0 5.622 1 9.226 5 100.72
尿苷 8.863 3 4.487 2 13.188 7 96.39 100.15 1.82
8.800 1 4.487 2 13.251 0 99.19
8.810 7 4.487 2 13.387 9 102.01
8.856 3 8.974 3 17.995 4 101.84
8.828 2 8.974 3 17.962 5 101.78
8.803 6 8.974 3 17.838 5 100.67
8.831 7 13.461 1 22.145 9 98.91
8.768 6 13.461 1 22.185 7 99.67
8.722 9 13.461 1 22.298 5 100.85
图的影响，发现这两种样品提取方式对结果的影响差异
不大，但鉴于超声提取操作更简便，故本研究最终选取
超声提取的方式进行蚕蛹样品的处理。此外，笔者通过
考察不同料液比（1∶25、1∶50、1∶100，g/mL）、不同提取时
间（30、40、50 min）对结果的影响，最终选择料液比1 ∶ 50
（g/mL）、提取时间40 min。
3.2 色谱条件的选择
在前期研究中，笔者先后采用两种流动相体系（甲
醇-水、甲醇-0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液）进行了分离条
件的探索。结果发现，以甲醇-水为流动相进行梯度洗
脱时，样品的色谱峰达不到基线分离，且样品图谱的信
息量较少；而采用甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液为流
动相进行梯度洗脱时，样品图谱中的色谱峰数量多、峰
形对称性和分离度均较好，图谱所反映的样品信息量较
大，故本研究最终以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液为
流动相进行梯度洗脱。此外，笔者前期利用二极管阵列
中国药房 2021年第32卷第14期