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2、4、6、12、24 h 时按“2.3.3”项下色谱条件进样测定，记 细胞的草酸钙簇晶，与现有文献记载的显微鉴别特征相
录峰面积。结果，芦丁峰面积的 RSD 为 0.65％（n＝6）， 一致 。前人对反枝苋药材有过单独的显微鉴别，但有
[3]
表明该供试品溶液在室温24 h内稳定。 关其水分、总灰分、酸不溶性灰分和水溶性浸出物含量
2.3.7 重复性试验 等检查项并未见相关报道，故本研究考察了上述检查
取同一批样品（编号 1），按“2.3.1”项下方法平行制 项，结果测得7批样品中水分、总灰分、酸不溶性灰分和

备6份供试品溶液，再按“2.3.3”项下色谱条件进样测定， 水 溶 性 浸 出 物 的 平 均 含 量 分 别 为 8.07％ 、12.76％ 、
记录峰面积，并采用外标法计算其含量。结果，芦丁的 0.36％和21.08％。
平均含量为0.887 mg/g，RSD为0.91％（n＝6），表明本方 3.2 定性和定量分析指标成分的选择
法重复性良好。 据现有研究报道，反枝苋药材中富含蛋白质、维生
2.3.8 加样回收率试验 素、脂肪酸等多种成分，且含有8种人体无法合成的必需
取 9 份已知芦丁含量的样品粉末（编号 3），每份约 氨基酸 [2，11] 。本课题组前期对反枝苋药材中的氨基酸进
0.5 g，精密称定，分别按样品已知量的 50％、100％、 行了薄层色谱鉴别，发现亮氨酸、缬氨酸的斑点较为明
150％加入芦丁对照品溶液，每个浓度平行 3 份，按 显，便于定性鉴别。同时，现有研究证实，亮氨酸和缬氨
“2.3.1”项下方法制备供试品溶液，再按“2.3.1”项下色谱 酸能够协同发挥修复肌肉、控制血糖、供能等作用，是人
条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果， 体内必不可少的氨基酸 。因此，本课题组最终选择亮
[12]
低、中、高质量浓度供试品溶液中芦丁的平均加样回收 氨酸和缬氨酸作为薄层鉴别的指标成分。而后，笔者通
率 分 别 为 99.14％ 、97.98％ 、98.80％ ，RSD 分 别 为 过查阅文献发现，反枝苋中黄酮类成分含量较高 。芦
[13]
0.97％、0.95％、0.96％（n＝3），表明本方法的准确度较 丁作为黄酮类成分的代表，具有抗炎、抗氧化、抗过敏、
好。加样回收率试验结果见表3。 抗病毒等功效 。因此，本课题组选取芦丁同时作为反
[14]
表3 加样回收率试验结果（n＝3） 枝苋药材薄层色谱鉴别和HPLC含量测定的指标成分。
Tab 3 Results of recovery tests（n＝3） 3.3 薄层色谱条件的选择
序号 取样量，g 已知量，mg 加入量，mg 测得量，mg 加样回收率，％ 平均回收率，％ RSD，％ 在芦丁的薄层色谱鉴别研究中，前期笔者先以甲醇
1 0.502 2 0.355 2 0.178 4 0.533 3 99.83 99.14 0.97
2 0.502 3 0.355 3 0.178 4 0.530 2 98.04 为溶剂进行芦丁提取，然后分别以乙酸乙酯-水-冰乙酸
3 0.502 4 0.355 3 0.178 4 0.532 9 99.55 （5 ∶ 2 ∶ 1.5，V/V/V）和乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸（9 ∶ 2 ∶ 1 ∶ 0.1，
4 0.502 1 0.355 3 0.356 8 0.702 5 97.31 97.98 0.95
5 0.502 4 0.355 1 0.356 8 0.703 3 97.59 V/V/V/V）为展开剂展开，发现所得色谱图均有严重的拖
6 0.502 3 0.355 3 0.356 8 0.708 7 99.05 尾现象。后经多次实验摸索后发现，这可能是样品前处
7 0.502 1 0.355 1 0.535 1 0.887 0 99.40 98.80 0.96 理方法不当所致。经查阅文献[9]后，笔者将上述所得的
8 0.502 0 0.355 1 0.535 1 0.877 9 97.70
9 0.502 1 0.355 1 0.535 1 0.886 4 99.29 芦丁甲醇提取液上样 D101 大孔吸附树脂柱，然后分别
2.3.9 样品含量测定 以水、15％乙醇 200 mL、30％乙醇 100 mL 进行梯度洗
分别取7批样品粉末（过三号筛）各约0.5 g，精密称 脱，以甲醇为溶剂对 30％乙醇洗脱部位进行芦丁提取，
定，每批药材平行称定2份，分别按“2.3.1”项下方法制备 再以乙酸乙酯-甲酸-水（6 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V）为展开剂展开，所
供试品溶液，再按“2.3.3”项下色谱条件进样测定，记录 得色谱图的斑点清晰、圆整，分离效果较好。在氨基酸
峰面积，并采用外标法计算样品中芦丁含量，取平均 的薄层色谱鉴别研究中，笔者参考文献[15－16]，分别以
值。结果，编号 1～7 的样品中芦丁的平均含量依次为 正丁醇-冰乙酸-水（4 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V）、0.2％茚三酮正丁醇
0.886、1.102、0.707、0.342、0.837、0.923、0.314 mg/g。 溶液-冰乙酸-水（6 ∶ 2.2 ∶ 1，V/V/V）和正丁醇-冰乙酸-
3 讨论 水-2％茚三酮乙醇溶液（3 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 0.25，V/V/V/V）为展开剂

3.1 药材鉴别与检查 进行展开。结果发现，以正丁醇-冰乙酸-水-2％茚三酮
为了更好地鉴别药材的基原，本课题组首先对 7 批 乙醇溶液（3 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 0.25，V/V/V/V）为展开剂时，所得色谱
反枝苋药材的性状和显微特征进行了鉴别。结果显示， 图的斑点明显且分离效果最好。并且，笔者后续通过考
7 批反枝苋药材的性状与《中国植物志（第二十五卷：第 察其在不同厂家硅胶G板[青岛海洋化工有限公司的硅
二分册）》 及文献[3]所描述的一致。在显微鉴别中，可 胶 G 板、烟台江友硅胶开发有限公司的预制硅胶 G 板、
[9]
明显地观察到螺纹导管和网纹导管；也可观察到红棕色 实验室硅胶G自制板（硅胶G购自青岛海洋化工有限公
的种皮细胞，且随处可见多细胞非腺毛以及镶嵌于叶肉 司）]、不同湿度（32％、58％、72％）、不同温度（4、25、

中国药房 2021年第32卷第14期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 14 ·1745 ·