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0.159 mg/mL；若按“2.3.2”项下方法制备，同法测定并计
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        算5-HMF的质量浓度为0.006 36 μg（以10 μL进样），低
                                                                 80
        于 5-HMF 含量检测的线性范围下限 0.01 μg，故基本可                         60
        判断丹参酒炙品中的 5-HMF 来源于美拉德反应，而非                             mAU  40
                                                                                             3
        黄酒。                                                      20    1
                                                                  0
        2.3 丹酚酸B、丹参酮ⅡⅡA及5-HMF的含量测定
                                                                   0   5   10  15  20  25  30  35  40
        2.3.1  色 谱 条 件     以 Agilent ZORBAX SB-C18（150                            t，min
                                                                              A.混合对照品溶液
        mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.1％磷酸溶
        液（B）为流动相进行梯度洗脱（0～5 min，7％A，检测波                          100             2
        长为 280 nm；5～6 min，7％A→25％A，检测波长为 280                     80
        nm；6～17 min，25％A，检测波长为286 nm；17～18 min，                 mAU  60
                                                                 40
        25％ A→68％ A，检 测 波 长 为 286 nm；18～35 min，                  20                         3
        68％A，检测波长为270 nm；35～40 min，68％A→7％A，                      0
        检测波长为280 nm）；柱温为20 ℃；流速为1.0 mL/min；                        0   5   10  15  20  25  30  35  40
                                                                                  t，min
        进样量为10 μL。                                                       B.丹参饮片供试品溶液（编号DS1）
        2.3.2  供试品溶液的制备          取丹参饮片，粉碎（过三号
                                                                100             2
        筛），取粉末，约0.20 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精                           80
        密加入甲醇 50 mL，密塞，称定质量，超声（功率 140 W，                         60
        频率 50 kHz）处理 30 min，放冷，再次称定质量，用甲醇                       mAU  40                     3
        补足减失的质量，摇匀，经 0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续                           20   1
                                                                  0
        滤液，即得。同法制得丹参酒炙品的供试品溶液。
                                                                   0   5   10  15  20  25  30  35  40
        2.3.3  混合对照品溶液的制备            分别精密称取丹酚酸                                    t，min
                                                                        C.丹参酒炙品供试品溶液（编号JDS1E）
        B、丹参酮Ⅱ A、5-HMF 对照品各适量，加甲醇制成上述3
        种成分质量浓度分别为 319.7、49.0、20.0 μg/mL 的单一                    100
        对照品贮备液。精密量取上述各单一对照品贮备液                                   80
        5.0、1.6、1.0 mL，置于同一 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释并                    mAU  60
                                                                 40
        定容，摇匀，得上述 3 种成分质量浓度分别为 159.85、                           20
        7.84、2.0 μg/mL的混合对照品溶液。                                   0
        2.3.4  系统适用性试验        取上述各溶液，并以甲醇作为                        0   5   10  15  20  25  30  35  40
                                                                                  t，min
        空白对照，按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱                                          D.空白对照（甲醇）
        图。结果，各成分分离良好，分离度均大于 1.5，理论板                            注：1. 5-HMF；2.丹酚酸B；3.丹参酮ⅡA
        数均不低于6 000，空白对照对测定无干扰，详见图1。                            Note：1. 5-HMF；2. salvianolic acid B；3. tanshinoneⅡA
        2.3.5  线性关系考察       取“2.3.3”项下丹酚酸 B、丹参酮            图1    丹酚酸B等3种成分的混合对照品、供试品、空白
        Ⅱ A各单一对照品贮备液，分别以1、3、5、10、15 μL进样；                        对照溶液的高效液相色谱图
        取“2.3.3”项下5-HMF单一对照品贮备液，用甲醇稀释1                     Fig 1  HPLC chromatograms of mixed control，test
        倍后，再分别以 1、3、5、10、15 μL 进样，另取“2.3.3”项下                     sample and blank control of 3 components as
        5-HMF 单一对照品贮备液，分别以 10、15 μL 进样，记录                         salvianolic acid B
        色谱图。以各待测成分的进样量（X，μg）为横坐标、峰面                        约 0.20 g，共 6 份，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，
        积（Y）为纵坐标进行线性回归。结果，丹酚酸 B 的回归                        再按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标
        方程为 Y＝1 025X－14.804（r＝0.999 9）、丹参酮Ⅱ A 为            准曲线法计算样品中3种待测成分的含量。结果，丹酚
        Y＝5 603.9X － 14.034（r＝0.999 9）、5-HMF 为 Y＝          酸 B、丹参酮Ⅱ A、5-HMF 的平均含量分别为 36.8、1.9、
        392.81X－1.132 6（r＝0.999 9）。表明，丹酚酸B、丹参酮             8.4 mg/g，RSD分别为1.0％、0.2％、1.0％（n＝6），表明方
        Ⅱ A、5-HMF 检 测 进 样 量 的 线 性 范 围 分 别 为 0.320～         法重复性良好。
        4.796、0.049～0.735、0.010～0.300 μg。                  2.3.8  稳定性试验       取“2.3.2”项下丹参酒炙品的供试
        2.3.6  精密度试验      精密吸取“2.3.3”项下混合对照品               品溶液（编号JDS1E），分别于室温下放置0、4、8、12、16、
        溶液，按“2.3.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰                      24 h 时按“2.3.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。
        面积。结果，丹酚酸 B、丹参酮Ⅱ A、5-HMF 峰面积的                      结果，丹酚酸 B、丹参酮Ⅱ A、5-HMF 峰面积的 RSD 分别
        RSD分别为0.1％、0.3％、0.9％（n＝6），表明仪器精密度                  为1.0％、0.8％、1.1％（n＝6），表明供试品溶液于室温下
        良好。                                                放置24 h内稳定性良好。
        2.3.7  重复性试验      取丹参酒炙品粉末（编号JDS1E），               2.3.9  加样回收率试验         精密称取已知含量的丹参酒


        中国药房    2021年第32卷第14期                                            China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 14  ·1717 ·
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