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枸橼酸钠抗凝处理后直接保存，作为全血样品；一部分                            3 结果
        以 3 000 r/min 离心 10 min，取上清液，作为血清样品。                3.1 红花黄色素对大鼠血清中炎症因子水平的影响
        在测定肺功能指标水平后，处死各组大鼠，剖取其肺组                                与对照组比较，模型组大鼠血清中 TNF-α、IL-6、
        织，一部分用于相关蛋白表达水平的检测，一部分进行                            IL-8 水平均显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，地塞米
        病理学观察。                                              松组和红花黄色素各剂量组大鼠血清中上述指标水平
        2.3 大鼠血清中炎症因子水平的测定                                  均显著降低（P＜0.01），详见表1。
            取“2.2”项下各组大鼠血清样品，按 ELISA 试剂盒                    表1   各组大鼠血清中炎症因子水平的测定结果（x±±s，
        说明书方法操作，采用酶标仪于450 nm波长下，测定血                              n＝10，pg/mL）
        清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-8的水平。                           Tab 1 The levels of inflammatory factors in serum of
        2.4 大鼠全血中血气相关指标水平的测定                                       rats in each group（x±±s，n＝10，pg/mL）
            取“2.2”项下各组大鼠全血样品，使用血气分析仪检                        组别              TNF-α        IL-6       IL-8
        测相关血气相关指标[动脉氧分压（PaO2 ）、血氧饱和度                         对照组            45.84±9.72  92.64±6.62  64.29±7.71
                                                             模型组           164.74±8.58 ＊＊  226.78±12.34  ＊＊  199.11±5.63  ＊＊
        （SaO2 ）、动脉二氧化碳分压（PaCO2 ）]的水平。                        地塞米松组          83.67±8.76 ##  111.36±9.72  ##  94.29±5.86  ##
        2.5 大鼠肺功能指标水平的测定                                     红花黄色素低剂量组     118.94±8.56 ##  154.92±7.76  ##  131.34±8.42 ##
                                                             红花黄色素中剂量组     105.62±5.05 ##  138.82±7.46  ##  113.87±6.91 ##
            各组大鼠取血后，采取仰卧位将其放置于肺功能检
                                                             红花黄色素高剂量组      92.87±10.04 ##  121.85±6.35 ##  96.07±6.20  ##
        测仪内，并进行气管插管，然后记录大鼠肺功能指标[肺                              注：与对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.01
                                                                                              ##
                                                                            ＊＊
        活量（FVC）、1 秒用力呼气量（FEV1）、FEV1/FVC、最大                     Note：vs. control group， P＜0.01；vs. model group，P＜0.01
                                                                               ＊＊
                                                                                                  ##
        呼气量（PEF）、最大呼气时中期流速（MMEF）]水平。                        3.2 红花黄色素对大鼠全血中血气相关指标水平的影响
        2.6  大鼠肺组织中 TLR4/NF-κB 通路相关蛋白表达水                        与对照组比较，模型组大鼠全血中 PaO2、SaO2水平
        平的检测                                                均显著降低（P＜0.01），PaCO2水平显著升高（P＜0.01）；
            采用Western blot法进行检测。取“2.2”项下各组大                 与模型组比较，地塞米松组和红花黄色素各剂量组大鼠
        鼠肺组织，切取其右中叶部分的肺组织（距肺门 3 mm                          的 PaO2、SaO2水平均显著升高（P＜0.01），PaCO2水平均
        处）适量，加入蛋白裂解液提取总蛋白，然后以 12 000                        显著降低（P＜0.01），详见表 2（表中，1 mmHg≈0.133
        r/min离心10 min，取上层蛋白液，以BCA蛋白定量试剂                     kPa）。
        盒检测蛋白浓度。蛋白经变性处理后，进行十二烷基硫                            表 2  各组大鼠全血中血气相关指标水平的测定结果
        酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）；转膜，以5％脱                           （x±±s，n＝10）
        脂奶粉在室温的条件下封闭 1 h；以 TBST 清洗 5 min×3                  Tab 2 The levels of blood gas related index in whole
        次，加入 TLR4、NF-κB、IκBα、β-actin 一抗（稀释度均为                      blood of rats in each group（x±±s，n＝10）
        1 ∶ 1 000），并于 4 ℃条件下孵育过夜；以 TBST 清洗 5                 组别            PaO2，mmHg     SaO2，％    PaCO2，mmHg
                                                             对照组            82.75±2.87  99.44±0.65  51.45±0.89
        min×3 次，加入相应二抗（稀释度均为 1 ∶ 5 000），于室温
                                                             模型组            52.88±2.43 ＊＊  73.33±0.23 ＊＊  59.42±0.57 ＊＊
        条件下孵育 1 h；以 TBST 清洗 5 min×3 次，加入 ECL 发               地塞米松组          72.34±1.68 ##  92.52±0.39 ##  52.79±0.57 ##
        光剂显色后，置于全自动凝胶成像系统中成像。采用                              红花黄色素低剂量组      59.77±1.50 ##  78.67±0.44 ##  56.01±0.54 ##
                                                             红花黄色素中剂量组      62.71±2.51 ##  84.61±0.72 ##  54.82±0.38 ##
        Image Pro Plus 6.0 软件分析图像，以目的蛋白与内参                   红花黄色素高剂量组      68.15±1.13 ##  89.58±0.75 ##  52.63±0.63 ##
        β-actin的灰度值的比值表示目的蛋白的表达水平。                             注：与对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.01
                                                                            ＊＊
                                                                                              ##
        2.7 大鼠肺组织的病理学形态观察                                      Note：vs. control group， P＜0.01；vs. model group，P＜0.01
                                                                                                  ##
                                                                               ＊＊
            取“2.2”项下各组大鼠肺组织，于 10％甲醛溶液中                      3.3 红花黄色素对大鼠肺功能指标水平的影响
        固定3 天后，经石蜡包埋、切片（5 μm），再进行苏木精-伊                          与 对 照 组 比 较 ，模 型 组 大 鼠 FVC、FEV1、FEV1/
        红（HE）染色，然后于显微镜下观察肺组织的病理学形                           FVC、PEF、MMEF水平均显著降低（P＜0.01）；与模型组
        态变化并拍照。                                             比较，地塞米松组和红花黄色素各剂量组大鼠上述指标
        2.8 统计学分析                                           水平均显著升高（P＜0.05或 P＜0.01），详见表3。
            采用 SPSS 20.0 统计学软件对数据进行分析，首先                    3.4  红花黄色素对大鼠肺组织中 TLR4/NF-κB 通路相
        采用方差齐性检验，将符合正态分布的计量资料以x±s                           关蛋白表达水平的影响
        表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采                                与对照组比较，模型组大鼠肺组织中 TLR4、NF-κB
        用LSD检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。                            蛋白表达水平均显著升高（P＜0.01），IκBα蛋白表达水


        ·1580 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13                                 中国药房    2021年第32卷第13期
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