Page 43 - 《中国药房》2021年13期
P. 43

apoptosis-related proteins and Wnt/β-catenin pathway-related proteins.
        KEYWORDS    Polygonatum sibiricum polysaccharides；Acute myocardial infarction；Oxidative stress；Wnt/β-catenin pathway


            急性心肌梗死（AMI）是一种常见的缺血性心脏病，                       1.2 主要药品与试剂
        是因冠状动脉供血急剧减少或中断导致急性缺血，从                                本研究所用主要药品与试剂有黄精多糖（纯度
        而引起严重而持续的心肌缺血性坏死                 [1－2] 。近年来，组      70％）、磷酸盐缓冲液（PBS，pH为6.0）（上海源叶生物科
        织工程和再生纳米医学等许多新方法被用于修复受损                            技有限公司，批号分别为 S27804、R20861），胰蛋白酶
                   [3]
        的心脏组织 ，但是这些方法仍难以愈合由 AMI 所造                         （美国 Gibco 公司，批号 25200056），阿司匹林肠溶片（沈
        成的心肌损伤。因此，寻找治疗 AMI 的药物具有重要                         阳奥吉娜药业有限公司，国药准字H20065051，规格100
        意义。                                                mg），SOD酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒（上海西格
            在心肌梗死缺血的最初几分钟，心肌会产生强烈的                         生物有限公司，批号 XG-E0829），RIPA 裂解液、BCA 蛋
                                                     [4]
        氧化应激反应，进而发生心肌损伤和心肌细胞凋亡 。                           白测定试剂盒、苏木精-伊红（HE）染色试剂盒（上海碧云
        相关研究发现，Wnt/β-联蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路                天生物技术有限公司，批号分别为 P0013K、P0011、
       （包括Wnt1、β-catenin等19个成员）与心肌细胞凋亡、坏                   C0105），MDA ELISA试剂盒、兔源Wnt1多克隆抗体、兔
                                  [5]
        死和氧化应激等具有重要关系 。黄精是百合科植物滇                           源β-catenin 单克隆抗体、兔源 caspase-3 单克隆抗体、兔
        黄精 Polygonatum kingianum Coll. et Hemsl.、黄精 P. si-  源 caspase-8 多克隆抗体、兔源 caspase-9 单克隆抗体、兔
        biricum Red.或多花黄精 P. cyrtonema Hua 的干燥根茎，          源Bax单克隆抗体、兔源Bcl-2单克隆抗体、兔源GAPDH
        主要活性成分为黄精多糖（P. sibiricum polysaccharides，          单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔免疫球蛋
        PSP）；PSP是由4种不同化学结构的单糖构成，相对分子                       白 G 二抗（美国 Abcam 公司，批号分别为 ab238573、
                 [6]
        量为8 921 。现代药理研究表明，PSP具有抗肿瘤、抗氧                      ab15251、 ab68183、 ab202068、 ab25901、 ab202068、
        化、抗炎、抗菌、调血糖、调血脂、抗病毒、增强免疫力等                         ab32503、ab182858、ab8245、ab6721），ECL 发光液（美国
        药理作用    [7－9] 。另有研究发现，PSP可改善心脏重塑模型                 Thermo Fisher Scientific 公司，批号 34094），2，7-二氯荧
                    [10]
        小鼠的心功能 。但PSP是否可通过抗氧化、抗凋亡、调                         光黄双乙酸盐（DCFH-DA）试剂盒（北京索莱宝科技有
        控Wnt/β-catenin通路作用来改善AMI尚不明确。                      限公司，批号CA1410）；其余试剂为实验室常用规格，水
            基于此，本研究以结扎左冠状动脉前降支的方法建                         为纯净水。
        立大鼠AMI模型，并检测PSP对模型大鼠氧化应激相关                         1.3  动物

        指标[超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和活性氧                           本研究所用动物为SPF级SD大鼠，8周龄，雄性，体
        簇（ROS）]、凋亡相关因子[B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2                质量 210～245 g，购自贵州省实验动物工程技术中心，
        相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶3（caspase-3）、caspase-8、            动物生产许可证号为SCXK（黔）2018-0001，动物使用许
        caspase-9]和 Wnt/β-catenin 信号通路相关蛋白（Wnt1、           可证号为 SYXK（黔）2018-0001。大鼠饲养于温度为
        β-catenin）的影响，以期为 PSP 的临床应用提供理论                    25 ℃、相对湿度为50％的环境中。所有大鼠均饲养1周
        依据。                                                后进行实验，实验过程严格遵行《实验动物管理条例》和
        1 材料                                               有关动物研究指导原则进行。
        1.1 主要仪器                                           2 方法
            本研究所用主要仪器有 BX51 型光学显微镜（日本                      2.1 造模、分组与给药
        Olympus 公司），XElx800型酶标仪（美国Perkin Elmer公                将60只大鼠按照随机数字表法分为空白对照组、模
        司），RM2235 型轮转切片机、EG1160 型包埋机、HI1220                型组、阿司匹林组（阳性对照，25 mg/kg，剂量根据文
        型烤片机（德国 Leica 公司），Centrifuge 5424R 型低温高            献[11]设置）和PSP低、中、高剂量组（0.5、1、2 g/kg，剂量
        速离心机（德国 Eppendorf 公司），1659001 型蛋白电泳                根据文献[12]设置），每组 10 只。以 1％戊巴比妥钠（50
        仪、Trans-Blot SD 型半干转膜仪（美国 Bio-Rad 公司），             mg/kg）腹腔注射麻醉所有大鼠，并以仰卧位将其固定于
        GIS-500 型凝胶成像仪（杭州米欧仪器有限公司），1E33                    手术台上。手术前，先以75％乙醇对大鼠胸部进行常规
        型超声心动图检查仪（荷兰Philips公司），ALC-V8S型小                   消毒，再用剪刀轻轻剖开其胸部皮肤和部分肋骨（手术
        动物呼吸机（美国Harvard Apparatus公司），ECG型小动                过程中使用小动物呼吸机将大鼠的呼吸频率维持在100
        物心电图监测系统（美国Iworx公司）。                               次/min，呼吸比维持在1∶2，潮气量维持在8 mL）；当大鼠


        中国药房    2021年第32卷第13期                                             China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13  ·1573 ·
   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48