Page 44 - 《中国药房》2021年13期
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心脏显露后，除空白对照组外，用镊子将其余各组大鼠                            的胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液；取该单细胞悬液以
        左冠状动脉前降支轻轻分离并进行结扎，直到左心室前                            3 000 r/min 离心 5 min，弃上清液；取细胞沉淀加入裂解
        壁部分心肌组织变为白色后将手术切口进行缝合，以复                            液提取总蛋白，然后采用BCA蛋白测定试剂盒检测蛋白
        制AMI模型。空白对照组大鼠除不进行结扎外，其他手                           浓度。蛋白经加热变性后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯

        术过程同造模方法操作。当大鼠心电图Ⅱ导联提示ST                            酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），转膜，以 5％的脱脂牛奶封
        段较结扎前抬高 0.2 mV，则表明心肌梗死模型造模成                         闭 2 h；以 TBST 缓冲液清洗 10 min×3 次，加入 GAPDH、
        功 。造模过程中，将造模失败或死亡的大鼠及时补                             Wnt1、β-catenin、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax 和
           [13]
        齐。造模成功后，空白对照组和模型组大鼠灌胃等体积                            Bcl-2 的一抗（稀释度均为 1 ∶ 1 000），于 4 ℃孵育过夜；
        生理盐水，各给药组大鼠灌胃相应药物（临用时均以生                            以 TBST 缓冲液清洗 10 min×3 次，加入二抗（稀释度为
        理盐水配制），灌胃体积为1 mL，每天给药1次，连续28天。                      1 ∶ 2 000），孵育2 h；以TBST缓冲液清洗10 min×3次，加
        2.2 大鼠心功能的检测                                        入ECL发光液显色，经全自动凝胶成像系统成像。采用
            末次给药后 24 h 时，以 1％戊巴比妥腹腔注射麻醉                     Image J v1.8.0 软件进行分析，以目的蛋白与内参（GAP-
        大鼠，然后将其固定在手术台上，采用超声心动图检测                            DH）灰度值的比值表示目的蛋白的表达水平。
        其左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS），以评                      2.7 统计学方法
        价其心脏功能。                                                 采用Graphpad Prism 7.0软件和SPSS 21.0统计软件
        2.3 取材和处理                                           对数据进行分析。数据以x±s表示，多组间比较采用单
            在心功能检测后，处死大鼠，取其心脏，分离左心室                         因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。
        前壁组织和心肌组织。左心室前壁组织部分以4％多聚                            3 结果
        甲醛固定液浸泡 24 h，备用；部分用于凋亡相关蛋白和                         3.1  PSP对AMI模型大鼠心功能的影响
        Wnt/β-catenin 通路相关蛋白表达水平的检测。心肌组                         与空白对照组比较，模型组大鼠的 LVEF、LVFS 均
        织用于氧化应激相关指标水平的检测。                                   显著降低（P＜0.05）；与模型组比较，PSP中、高剂量组和
        2.4  大鼠心肌组织病理学形态观察                                  阿司匹林组大鼠的 LVEF、LVFS 均显著升高（P＜0.05），

            取“2.3”项下以 4％多聚甲醛固定的大鼠左心室前                       详见表1。
        壁组织，经梯度乙醇脱水、石蜡包埋、切片后，以二甲苯                           表1 各组大鼠心功能指标的检测结果（x±±s，n＝10，％％）
        和梯度乙醇进行脱蜡和水合；然后将上述组织置于苏木                            Tab 1 Cardiac function indexes of rats in each group
        精染色液中染色1 min，以自来水冲洗后，再置于盐酸乙                               （x±±s，n＝10，％％）
        醇溶液中浸泡3 s；继续以自来水冲洗后，将上述组织置                           组别                    LVEF             LVFS
        于伊红染色液中染色 1 min，再进行脱水、封闭，然后置                         空白对照组               63.26±3.45       46.72±1.83
                                                             模型组                 41.35±1.57 ＊     29.36±1.58 ＊
        于显微镜下观察。                                             阿司匹林组               60.28±2.64 #     40.97±1.34 #
        2.5  大鼠心肌组织中氧化应激相关指标水平的检测                            PSP低剂量组             42.91±1.76       29.84±1.45
                                                             PSP中剂量组             56.25±2.48 #     37.23±1.27 #
            取“2.3”项下心肌组织适量，加入 PBS，于低温条件                      PSP高剂量组             59.86±2.72 #     40.13±1.15 #
        下进行研磨，然后以 12 000 r/min 离心 5 min，取上清液                   注：与空白对照组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05
                                                                               ＊
                                                                                                 #
        按照ELISA试剂盒说明书方法操作，采用酶标仪分别于                             Note：vs. blank control group，P＜0.05；vs. model group，P＜0.05
                                                                                   ＊
                                                                                                     #
        490、695 nm 波长下测定大鼠心肌组织中 SOD、MDA 的                   3.2 PSP对AMI模型大鼠心肌组织病理学形态的影响
        水平。另取“2.3”项下大鼠心肌组织适量，于无菌条件下                             空白对照组大鼠心肌组织结构完整，心肌纤维排列
        加入 PBS 适量研磨，再以 0.062 5％的胰蛋白酶消化，制                    整齐、无损伤；模型组大鼠心肌结构紊乱，有大量炎性细

        成单细胞悬液；取该单细胞悬液适量，按DCFH-DA试剂                         胞浸润等；PSP低剂量组大鼠心肌组织炎性细胞浸润较
        盒说明书方法操作，采用流式细胞仪检测大鼠心肌细胞                            模型组未见明显减轻，PSP中、高剂量组和阿司匹林组大
        中ROS水平。                                             鼠心肌组织结构紊乱和炎性细胞浸润较模型组均减轻，
        2.6  大鼠左心室前壁组织中凋亡相关蛋白和 Wnt/                         详见图1。
        β-catenin通路相关蛋白表达水平的检测                              3.3 PSP对AMI模型大鼠心肌组织中氧化应激相关指
            采用Western blot法进行检测。取“2.3”项下大鼠左                 标水平的影响
        心室前壁组织适量，加入 PBS 适量研磨，再以 0.062 5％                        与空白对照组比较，模型组大鼠心肌组织中SOD水


        ·1574 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13                                 中国药房    2021年第32卷第13期
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