Page 44 - 《中国药房》2021年12期

表1 各组OA软骨细胞凋亡率的检测结果（x±±s，n＝6） 蛋白表达水平和 LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ比值均显著升
Tab 1 Apoptotic rate of OA chondrocytes in each 高（P＜0.05）。各组细胞中 mTOR、Beclin-1 和 LC3A/B
group（x±±s，n＝6） 蛋白表达的电泳图见图4，表达水平的检测结果见表3。
组别 凋亡率，％ 组别 凋亡率，％
溶剂对照（0.1％DMSO）组 5.08±0.94 5％LBJN组 2.81±0.67 mTOR 289 kDa
2 μmol/L verteporfin组 53.78±4.46 ＊ 2 μmol/L verteporfin+5％LBJN组 3.54±1.03 #
Beclin-1 60 kDa
5 μmol/L verteporfin组 69.81±4.95 ＊ 5 μmol/L verteporfin+5％LBJN组 14.03±3.67 Δ
＊
注：与溶剂对照组比较，P＜0.05；与2 μmol/L verteporfin组比较， LC3A/B-Ⅰ 16 kDa
LC3A/B-Ⅱ 14 kDa
Δ
# P＜0.05；与5 μmol/L verteporfin组比较，P＜0.05
Note：vs. solvent control group， P＜0.05；vs. 2 μmol/L verteporfin β-actin 45 kDa
＊
#
group，P＜0.05；vs. 5 μmol/L verteporfin group，P＜0.05
Δ
空白对照组 2.5％LBJN组 5％LBJN组
（P＜0.05），而 cleaved-caspase-3 蛋白的表达水平显著降 图 4 各组 OA 软骨细胞中 mTOR、Beclin-1 和 LC3A/B
低（P＜0.05）。与空白对照组比较，2.5％、5％LBJN组细 蛋白表达的电泳图
胞中YAP、Bcl-2蛋白的表达水平均显著升高（P＜0.05）， Fig 4 Electrophoretograms of protein expression of
而 cleaved-caspase-3 蛋白的表达水平均显著降低（P＜ mTOR，Beclin-1 and LC3A/B of OA chondro-
0.05）。各组细胞中YAP、Bcl-2和cleaved-caspase-3蛋白 cytes in each group
表达的电泳图见图3，表达水平的检测结果见表2。
表 3 各组 OA 软骨细胞中 mTOR、Beclin-1 和 LC3A/B
蛋白表达水平的测定结果（x±±s，n＝3）
YAP 65～75 kDa
Tab 3 Protein expression of mTOR，Beclin-1 and
Bcl-2 26 kDa
LC3A/B of OA chondrocytes in each group
19 kDa （x±±s，n＝3）
cleaved-
caspase-3 17 kDa
组别 mTOR/β-actin Beclin-1/β-actin LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ
空白对照组 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00
β-actin 45 kDa
2.5％LBJN组 0.80±0.07 □ 1.30±0.02 □ 1.30±0.06 □
溶剂对 2 μmol/L 2 μmol/L 空白对 2.5％LBJN 5％LBJN □ □ □
照组 verteporfin verteporfin+ 照组 组 组 5％LBJN组 0.66±0.06 1.48±0.02 1.49±0.06
组 5％LBJN组 □
图 3 各组 OA 软骨细胞中 YAP、Bcl-2 和 cleaved-cas- 注：与空白对照组比较，P＜0.05
Note：vs. blank control group， P＜0.05
□
pase-3蛋白表达的电泳图 4 讨论
Fig 3 Electrophoretograms of protein expression of
YAP，Bcl-2 and cleaved-caspase-3 of OA chon- 关节软骨中的细胞外基质是维持正常软骨功能的
重要物质，其由分布在关节软骨中唯一的软骨细胞分泌
drocytes in each group
而成，而异常的软骨细胞凋亡是导致软骨细胞减弱或丧
表 2 各组 OA 软骨细胞中 YAP、Bcl-2 和 cleaved-cas- 失相关分泌功能，从而导致关节软骨退变的主要病理因
pase-3蛋白表达水平的检测结果（x±±s，n＝3） 素 [17－18] 。因此，通过有效的途径抑制软骨细胞凋亡将可
Tab 2 Protein expression of YAP，Bcl-2 and cleaved- 能成为防治 OA 的重要手段。相关研究发现，YAP 可调
caspase-3 of OA chondrocytes in each group 控软骨细胞成熟、增殖、分化并维持软骨表型特征 ，且
[19]
（x±±s，n＝3） 在 OA 软骨组织中 YAP 的表达下降 。因此，本研究利
[3]
组别 YAP/β-actin Bcl-2/β-actin cleaved-caspase-3/β-actin 用 YAP 抑制剂 verteporfin 构建软骨细胞凋亡模型。通
溶剂对照组 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00 过流式细胞术检测后发现，2、5 μmol/L verteporfin 均能
2 μmol/L verteporfin组 0.67±0.10 ＊ 0.81±0.06 ＊ 1.92±0.12 ＊
2 μmol/L verteporfin+5％LBJN组 1.73±0.05 # 1.51±0.11 # 1.40±0.09 # 促进软骨细胞凋亡；且与单用verteporfin组比较，对应浓
空白对照组 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00 度的 verteporfin+LBJN 联用组细胞的凋亡率均显著降
2.5％LBJN组 1.36±0.03 □ 1.66±0.09 □ 0.57±0.06 □ 低。以上结果表明，LBJN 具有抑制软骨细胞凋亡的作
5％LBJN组 1.50±0.04 □ 1.89±0.04 □ 0.16±0.03 □
用。Bcl-2 是重要的凋亡抑制因子，其可通过抑制下
注：与溶剂对照组比较，P＜0.05；与2 μmol/L verteporfin组比较，
＊
游 caspase-3 的激活，有效地抑制细胞凋亡的发生 。
[20]
# P＜0.05；与空白对照组比较，P＜0.05
□
＊
Note：vs. solvent control group，P＜0.05；vs. 2 μmol/L verteporfin caspase-3 是细胞凋亡过程中最主要的终末剪切酶，而
group，P＜0.05；vs. blank control group，P＜0.05 cleaved-caspase-3 是 caspase-3 的活化形式，在细胞凋亡
#
□
3.4 各组 OA 软骨细胞中自噬相关蛋白 mTOR、Be- 的发生过程中 cleaved-caspase-3 的表达水平会明显升
[21]
clin-1和LC3A/B表达的检测结果 高 。由于2、5 μmol/L verteporfin对软骨细胞凋亡的影
与 空 白 对 照 组 比 较 ，2.5％ 、5％ LBJN 组 细 胞 中 响无明显差异，因此本研究以 2 μmol/L verteporfin 为凋
mTOR 蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05），而 Beclin-1 亡诱导剂进行了后续凋亡相关蛋白表达的检测实验。
·1446 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 12 中国药房 2021年第32卷第12期