Page 43 - 《中国药房》2021年12期

备细胞悬液、接种并常规培养24 h。将细胞分为0（空白 3.2 细胞凋亡的检测结果
对照）、2.5％LBJN、5％LBJN 组。各组细胞经相应试剂 与溶剂对照组比较，2、5 μmol/L verteporfin 组细胞
或药物作用 48 h 后，检测细胞中 mTOR、Beclin-1 和 的凋亡率均显著升高（P＜0.05），且2、5 μmol/L vertepor-
LC3A/B 蛋 白 的 表 达 水 平 。 其 中 ，mTOR、Beclin-1、 fin 组细胞凋亡率组间比较差异无统计学意义（P＞
LC3A/B一抗稀释比例均为1 ∶ 1 000，HRP标记的山羊抗 0.05）。以上结果表明，2、5 μmol/L verteporfin 均可诱导
兔 IgG 二抗的稀释比例为 1 ∶ 1 000，其余条件均同“2.4” 细胞凋亡，且两个浓度的作用效果相当。与溶剂对照组
比较，5％LBJN组细胞凋亡率的差异无统计学意义（P＜
项下。实验重复3次，结果以空白对照组为参照进行标
0.05），表明正常情况下 LBJN 对细胞凋亡无影响；与单
准化处理。
用 verteporfin 组比较，对应浓度的 verteporfin+LBJN 联
2.6 统计学方法
用组细胞的凋亡率均显著降低（P＜0.05），表明LBJN具
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。计量资
有抑制软骨细胞凋亡的作用。各组OA软骨细胞凋亡检
料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间
测的流式细胞图见图2，凋亡率的检测结果见表1。
两两比较采用LSD检验。P＜0.05表示差异具有统计学
10 8 10 8
意义。
10 7 10 7
3 结果 10 6 10 6
3.1 人OA软骨细胞的提取和鉴定结果 PI-A 10 5 PI-A 10 5
细胞经分离后正常贴壁生长，于倒置显微镜下观察 10 4 10 4
10 3 10 3
到其呈长梭形和多边形（图 1A）。经甲苯胺蓝染色后，
细胞核呈深蓝色，细胞质颜色则较浅；细胞界限清楚，呈 10 1.5 10 1.5
10 1.8 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7.5 10 1.8 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7.5
长梭形或多边形（图1B）。经免疫荧光染色后，细胞均表 FITC-A FITC-A
A.溶剂对照组 B. 2 μmol/L verteporfin组
现出较强的红色荧光（图1C），表明ColⅡ荧光染色为阳 10 8 10 8
性（ColⅡ是构成软骨基质的主要成分之一，故可通过检 10 7 10 7
测其表达情况对软骨细胞进行鉴定 ）。以上结果均符 10 6 10 6
[16]
合 OA 软骨细胞的特征，故鉴定分离出的细胞为 OA 软 PI-A 10 5 PI-A 10 5
骨细胞。 10 4 10 4
10 3 10 3
10 1.5 10 1.5
10 1.8 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7.5 10 1.8 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7.5
FITC-A FITC-A
C. 5 μmol/L verteporfin组 D. 5％LBJN组
10 8 10 8
10 7 10 7
10 6 10 6
PI-A 10 5 PI-A 10 5
10 4 10 4
A.未染色的第2代OA软骨细胞 B.甲苯胺蓝染色后的OA软骨细胞 10 3 10 3

10 1.5 10 1.5
10 1.8 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7.5 10 1.8 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7.5
FITC-A FITC-A
E. 2 μmol/L verteporfin+5％LBJN组 F. 5 μmol/L verteporfin+5％LBJN组
图2 各组OA软骨细胞凋亡检测的流式细胞图
Fig 2 Flow cytometries of OA chondrocytes apoptosis
in each group

3.3 各组 OA 软骨细胞中凋亡相关蛋白 YAP、Bcl-2、
C. ColⅡ免疫荧光染色后的OA软骨细胞 cleaved-caspase-3表达的检测结果
图 1 人原代 OA 软骨细胞的形态观察与鉴定结果 与溶剂对照组比较，2 μmol/L verteporfin 组细胞中
（×200） YAP、Bcl-2 蛋白的表达水平均显著降低（P＜0.05），而
Fig 1 Morphological observation and identification cleaved-caspase-3 蛋白的表达水平显著升高（P＜0.05）；
results of human primary OA chondrocytes（× 与2 μmol/L verteporfin组比较，2 μmol/L verteporfin+5％
200） LBJN组细胞中YAP、Bcl-2蛋白的表达水平均显著升高

中国药房 2021年第32卷第12期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 12 ·1445 ·