Page 53 - 《中国药房》2021年10期

比较采用LSD检验。P＜0.05为差异有统计学意义。 显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01），但 60 µmol/L 染料木素
表1 各基因引物序列及扩增产物长度 组G0/G1期细胞比例显著降低（P＜0.01）；与30 µmol/L染
Tab 1 Primer sequence and amplified product length 料木素组比较，60 µmol/L 染料木素组 G0/G1细胞比例显
of each gene 著降低（P＜0.01），但 G2/M 期细胞比例显著升高（P＜
引物序列（5′→3′） 扩增产物 0.01）。不同浓度染料木素作用 24 h 后对 CNE1 细胞周
引物名称
上游引物 上游引物 长度，bp 期分布影响的流式细胞图见图 1，细胞周期测定结果见
GAPDH GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG 149 表3。
p53 GAGGTTGGCTCTGACTGTACC TCCGTCCCAGTAGATTACCAC 147
p21 CAGGGGACAGCAGAGGAAGA CGGCGTTTGGAGTGGTAGAA 145 100 140
STC2 CAGTTGCAGCGGGAATGCT TCACGAGGTCCACGTAGGGT 144 120
80
FGF2 TTCTTCCTGCGCATCCACC GCCAGTAATCTTCCATCTTCCTTC 148
100
CDK6 CCAGCAGCGGACAAATAAAA GCGTGACGACCACTGAGGTTA 146 60 80
CYCLIN D CAGAAGTGCGAGGAGGAGGT CGGATGGAGTTGTCGGTGTAG 146 细胞数 细胞数 60
PI3K AACCTTATTATTACCCTCCCTTCG GGAAAATCTCTCGGCAGTCTTG 151 40
40
AKT TACATCAAGACCTGGCGGC ACAGTCTGGATGGCGGTTG 143 20
20
3 结果 0 0
3.1 染料木素对CNE1细胞增殖的影响结果 0 100 200 300 400 500 600 0 100 200 300 400 500 600 700
DNA含量 DNA含量
加药干预 24、48、72 h 后，与空白对照组比较，12.5、 A.空白对照组 B. 15 μmol/L染料木素组
25、50、100、150 µmol/L 染料木素组细胞的增殖抑制率 120 140
均显著升高（P＜0.01）。在相同浓度染料木素作用下， 100 120
80 100
细胞的增殖抑制率有随作用时间延长而升高的趋势；在 80
加药干预相同时间时，细胞的增殖抑制率有随染料木素 细胞数 60 细胞数 60
40
浓度增加而升高的趋势。药物作用24、48、72 h时的IC50 40
20
分别为 56.32、34.13、21.90 µmol/L。可见，染料木素对 20
0 0
CNE1 细胞的增殖具有明显的抑制作用，且该作用呈浓 0 100 200 300 400 500 600 700 0 100 200 300 400 500 600 700
DNA含量 DNA含量
度-时间-效应趋势。不同浓度染料木素作用不同时间后 C. 30 μmol/L染料木素组 D. 60 μmol/L染料木素组
对CNE1细胞增殖的影响结果见表2。 图1 不同浓度染料木素作用24 h对CNE1细胞周期影
表2 不同浓度染料木素作用不同时间对CNE1 细胞增 响的流式细胞图
殖的影响结果（x±±s，n＝3，％％） Fig 1 Flow cytometry of the effects of different con-
Tab 2 Effects of different concentrations of genistein centrations of genistein on cell cycle of CNE1
on the proliferation of CNE1 cells after treated cells after treated for 24 h
for different time（x±±s，n＝3，％％） 表3 不同浓度染料木素作用24 h对CNE1细胞周期分
增殖抑制率，％ 布的影响结果（x±±s，n＝3，％％）
组别
24 h 48 h 72 h Tab 3 Effects of different concentrations of genistein
空白对照组 0 0 0
12.5 μmol/L染料木素组 26.02±1.53 ＊＊ 29.27±3.35 ＊＊ 32.60±3.01 ＊＊ on cell cycle of CNE1 cells after treated for 24 h
25 μmol/L染料木素组 38.35±2.28 ＊＊ 43.90±2.78 ＊＊ 54.30±2.57 ＊＊ （x±±s，n＝3，％％）
50 μmol/L染料木素组 43.36±1.86 ＊＊ 57.53±1.40 ＊＊ 75.85±1.15 ＊＊ 组别 G0/G1期 S期 G2/M期
100 μmol/L染料木素组 59.56±3.35 ＊＊ 67.54±1.62 ＊＊ 83.70±0.52 ＊＊
空白对照组 51.19±1.96 40.50±3.15 8.32±1.83
150 μmol/L染料木素组 68.93±3.28 ＊＊ 83.94±0.89 ＊＊ 95.12±1.89 ＊＊
15 μmol/L染料木素组 69.45±8.03 ＊＊ 22.05±7.54 ＊＊ 8.50±2.66
注：与空白对照组比较， P＜0.01 30 μmol/L染料木素组 63.94±4.22 ＊ 22.11±4.09 ＊＊ 13.95±0.98 ＊#
＊＊
Note：vs. blank control group， P＜0.01 60 μmol/L染料木素组 12.81±1.20 ＊＊##ΔΔ 23.52±4.43 ＊＊ 63.67±3.59 ＊＊##ΔΔ
＊＊
3.2 染料木素对CNE1细胞周期的影响结果 注：与空白对照组比较，P＜0.05， P＜0.01；与15 µmol/L染料木
＊＊
＊
#
##
Δ Δ
素组比较，P＜0.05，P＜0.01；与 30 µmol/L 染料木素组比较， P＜
与空白对照组比较，15、30 µmol/L染料木素组G0/G1
0.01
期细胞比例显著升高（P＜0.05或P＜0.01），但60 µmol/L
＊＊
＊
Note：vs. blank control group， P＜0.05， P＜0.01；vs. 15 µmol/L
染料木素组 G0/G1期细胞比例显著降低（P＜0.01）；15、
#
genistein group， P＜0.05， P＜0.01；vs. 30 µmol/L genistein group，
##
30、60 µmol/L 染料木素组 S 期细胞比例均显著降低 ΔΔ P＜0.01
（P＜0.01）；30、60 µmol/L 染料木素组 G2/M 期细胞比例 3.3 染料木素对CNE1细胞凋亡的影响
均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。与15 µmol/L染料木 空白对照组和15、30、60 µmol/L染料木素组细胞的
素组比较，30、60 µmol/L染料木素组G2/M期细胞比例均 凋亡率分别为（4.37±2.02）％、（13.06±3.96）％、（23.28±
中国药房 2021年第32卷第10期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 10 ·1199 ·