Page 46 - 《中国药房》2021年第9期
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targets of Liangfu pill were screened out. Liangfu pill can inhibit the expression of inflammatory factors by inhibiting MAPK，NF-κ
        B，TNF and PI3K/Akt signaling pathway，and thus play an important role in improving gastric ulcer.
        KEYWORDS     Liangfu pills；Network pharmacology；Gastric ulcer；Mechanism；Mice


            胃溃疡是一种常见的消化系统疾病，随着人们年龄                          法（ELISA）试剂盒（武汉华联科生物工程有限公司，批
        增长和工作压力的增加，胃溃疡的发病率不断升高；胃                            号分别为 20190618、20200613、20200606），兔源细胞肿
        溃疡的形成是一个复杂的多因素过程，与保护性和侵袭                            瘤抗原 p53（TP53）单克隆抗体、兔源 c-Jun 单克隆抗体、
        性因子之间的生物学平衡失调及胃黏膜损害有关                       [1－2] 。  兔源 p38 丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）多克隆抗体、兔
        慢性饮酒、吸烟、压力、幽门螺杆菌感染等是导致消化性                           源 苏 氨 酸 激 酶（Akt）多 克 隆 抗 体 、兔 源 磷 酸 化 Akt
        溃疡的最常见原因，若治疗不及时，患者胃部可出现出                           （p-Akt）多克隆抗体、兔源肿瘤坏死因子α（TNF-α）单克
        血、穿孔、梗阻，甚至癌变等并发症 。                                  隆 抗 体（美 国 Abcam 公 司 ，批 号 分 别 为 ab32049、
                                     [3]
            良附丸始载于清代《良方集腋》，由高良姜 Alpinia                     ab40766、ab120235、ab38449、ab8805、ab109322），兔 源
        officinarum Hance 和香附 Cyperus rotundus L.两味药组       GAPDH 多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔
        成，具有疏肝理气、温胃祛寒的功效，临床常用于胃痛、                           IgG二抗（美国Cell Signaling Technology公司，批号分别
        消化性溃疡、胃癌、胆囊炎的治疗 。现代药理学研究发                           为 5794s 、7074），BCA 蛋白定量试剂盒（福州飞净生物
                                     [4]
        现，良附丸具有抗应激性溃疡，降低胃肠蠕动、胃酸酸度                           技术有限公司，批号PH0326），ECL超敏化学发光液（新
                                             [5]
        和胃蛋白酶活性，以及抗炎镇痛的药理作用 。                               赛美生物科技有限公司，批号P10100），哺乳动物蛋白抽
            网络药理学是以系统生物学的理论为基础，应用组                          提 试 剂（美 国 Thermo Fisher Scientific 公 司 ，批 号
        学、网络可视化等多种方法，建立系统网络模型，从整体                           78502），蛋白酶抑制剂、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝
        上考察药物对疾病的干预与影响，揭示药物、疾病、靶点                           胶电泳（SDS-PAGE）试剂盒（上海碧云天生物技术有限
        与通路之间的复杂关系，对中药作用机制以及新药研发                            公司，批号分别为 P1065、P0012A）；其余试剂为实验室
        具有重要意义       [6－8] 。基于此，本课题组采用网络药理学                 常用规格，水为蒸馏水。
        方法，挖掘良附丸治疗胃溃疡的活性成分，预测其作用                            1.3  动物
        靶点及相关信号通路，探讨良附丸抗胃溃疡的作用机                                 本研究所用动物为 SPF 级雄性昆明小鼠，6～8 周
        制，并进一步通过动物实验进行验证，以期为良附丸的                            龄，体质量（19±2）g，购自湖南长沙市天勤生物技术有
        进一步开发与利用提供理论基础。                                     限公司，动物生产合格证号为SCXK（湘）2019-0014。所
        1 材料                                                有小鼠均饲养于12 h/12 h明暗交替的房间内，室内温度
        1.1  主要仪器                                           为（25.0±1.0）℃、相对湿度为（50.0±10.0）％，均给予标
            本研究所用主要仪器有：VictorTMX3 型多标记微                     准饲料和饮用水喂养。
        孔板酶标仪（美国PekinEImer公司），TDL-4型台式离心                    2 方法与结果
        机（上海安亭科学仪器厂），SZN45N-B4舜宇体视显微镜                       2.1  良附丸活性成分的筛选及靶点预测
        （河南予华仪器有限公司），Trans-Blot Turbo型全能型蛋                      通过检索中药系统药理数据库（TCMSP，http：//lsp.
        白转膜仪、Power Pac Basic 型电泳仪（美国 BioRad 公               nwu.edu.cn/tcmsp.php）收集良附丸组方中药高良姜和香
        司），Odyssey 红外荧光扫描系统（美国 LI-COR 公司），                  附的化学成分，以口服生物利用度（OB）≥30％和类药
                                                                                       [9]
        R-200 型旋转蒸发仪（日本Buchi公司）。                            性指数（DL）≥0.18 为筛选条件 ，结合文献[10－12]确
        1.2 主要药品与试剂                                         定高良姜和香附的活性成分，然后在TCMSP中点击“活
            高良姜和香附均购自广州弘联医药药材有限公司                           性成分”选项，得到活性成分所对应的潜在蛋白靶点；将
        （批号分别为 20201105、20201112），经贵州中医药大学                  所有靶点合并去重后，通过 Unipot 数据库（http：//www.
        孙庆文教授鉴定分别为姜科山姜属植物高良姜A. offici-                      uniprot.org/）对蛋白名称进行标准化，即得到良附丸的潜
        narum Hance的干燥根茎和莎草科植物莎草C. rotundus L.              在作用靶点。结果，共筛选出良附丸的9个活性成分，如
        的干燥根茎；所用药品与试剂主要有盐酸雷尼替丁胶囊                            异鼠李素、β-谷甾醇、山柰酚、槲皮素等，并获得206个潜
        （山西云鹏制药有限公司，批号G180402，规格按雷尼替                        在作用靶点。良附丸活性成分信息见表1。
        丁计为0.15 g），无水乙醇（国药集团化学试剂有限公司，                       2.2 良附丸活性成分与胃溃疡的共同靶点筛选
        批号 20201011，纯度 99.0％），小鼠胃泌素（GAS）、白细                     以“Gastric ulcer”为关键词，在 GeneCards 数据库
        胞介素 6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫吸附                   （https：//www.genecards.org/）、OMIM 数 据 库（https：//


        ·1064 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 9                                   中国药房    2021年第32卷第9期
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